骨髓间质干细胞的分离和培养
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大鼠骨髓间质干细胞的分离和培养:取3-4周龄SD大鼠断颈处死,75%酒精浸泡5分钟,无菌条件下取双侧股骨,彻底清除附着其上的肌肉组织,去除两端骨骺,暴露骨髓腔,PBS液反复冲洗骨髓腔至骨髓腔变白,吹打离散细胞,将冲洗液收集于离心管中,1100r/min离心4min,弃去上清及脂肪,加入DMEM培养液6-7ml,重悬细胞种植于25cm2培养瓶中,37℃、5℅CO2饱和湿度下培养,3d后更换培养液,去除未贴壁细胞,以后每3d换液一次,待贴壁细胞达90%融合时,0.25%胰蛋白酶和%0.01依地酸消化贴壁细胞,然后加入等量培养液终止消化,吸管反复吹打,转移至无菌离心管中,1000r/min离心10min,弃去上清夜,然后用培养液重悬细胞,按1:2传代,随着换液和传代细胞逐渐纯化。 |