SDS-PAGE凝胶的制备过程
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聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE)凝胶的制备至关重要,凝胶制备不均,好好的样品就给糟蹋了,以下是SDS-PAGE胶凝胶的制备步骤。
如何配制SDS-PAGE 胶凝胶的制备过程:
1、 按要求装配好垂直电泳板,两块玻璃板的两侧及底部用1%的琼脂 糖封边,防止封闭不严而使聚丙烯酰胺液漏出。
2、 将装好的玻璃电泳板倾斜成45~60℃角。
3、 按表3配制所需%浓度凝胶的毫升数。
4、 加入TEMED后,立即混匀,缓缓倒入两玻璃板间的胶床中,直到液体接近溢出时为止。
5、 立即插入适当的梳子,密切注意防止梳齿下产生气泡,用一有力的夹将梳子夹在一边的玻璃板上,然后将玻璃板斜靠在物体上,使成10°角,可减少液体泄漏的机会。
6、 室温聚合一小时后,将玻璃板插入电泳槽 中,上紧,倒入0.1XTBE缓冲液。
7、 小心取出梳子,加样。
How to Make an SDS-PAGE gel
Alright so here’s a quick video on how to cast an SDS-PAGE gel. Although recipes can vary, the ingredients shown here are almost always used. Remember: always add TEMED last, and pour into plates immediately after!
Already know how to make a gel, but have problems with leaky gels? Check out our other video on How to Avoid a Leaky SDS-PAGE gel.
Okay now that you know how to make it, check out this video on How to Run an SDS-PAGE gel.
注意事项:凝胶制备的过程很简单,但是凝胶一定要均匀无气泡,取出梳子的时候一定要小心,放置将胶孔戳破。