凝胶中PCR产物再扩增标本PCR反应模板的制备

有时DNA模板来源较困难，如病毒核酸或cDNA，一次PCR成功后，要想多获得一些PCR产物，用原模板较浪费，此时可用凝胶中PCR产物作为模板，用低熔点胶回收后溶解直接用于PCR。

操作方法

1. 用合适浓度（1%）的低熔点胶分离扩增产物；

2. 切下预期的产物，放于微量离心管中，可保存于4℃或立即溶解应用；

3. 65℃保温10min，使胶溶化，在65℃下用65℃无菌水稀释至0.1ng/μl，PCR中加量不应超过1ng。

注意事项

1. DNA用量不应太多，一般在10pg左右，太多的产物再次扩增会出现拖尾现象；

2. 电泳缓冲液（TAE或TBE）中的EDTA浓度要使用0.2mmol/L，因EDTA可螯合Mg2+，使用正常浓度的EDTA，要加入等摩尔的MgCl2以保证PCR中Mg2+的浓度。