pUC18 和 pUC19质粒图谱

相关专题

那些实验室常用的克隆载体

pUC18 和 pUC19质粒 图谱

pUC18 和 pUC19 大小只有 2686bp ，是最常用的质粒载体 ，其结构组成紧凑，几乎不含多余的 DNA 片段，GenBank注册号为 L08752(pUC18)和 X02514(pUC19)。由 pBR322 改造而来，其中 lacZ (MSC)来自 M13mp18/19 图 3-4 是其质粒图谱。

这两个质粒的结构几乎是完全一样的，只是多克隆位点的排列方向相反。这些质粒缺乏控制拷贝数的 rop 基因，因此其拷贝数达 500-700 。 pUC 系列载体含有一段 lacZ 蛋白氨基末端的部分编码序列，在特定的受体细胞 中可表现 α-互补作用。因此在多克隆位点中插入了外源片段后，可通过 α-互补作用形成的蓝色和白色菌落筛选重组质粒。

<center> <img alt="pUC18 和 pUC19质粒图谱" height="483" src="http://img.dxycdn.com/trademd/upload/asset/meeting/2013/09/06/A1378380429.jpg" width="547" /></center>

特征序列区位：

 

pBR322_origin		1471 - 852
Ampicillin		2486 - 1626
lac_promoter		543 - 514
AmpR_promoter		2556 - 2528
M13_pUC_rev_primer		500 - 478
M13_reverse_primer		479 - 461
M13_forward20_primer		379 - 395
M13_pUC_fwd_primer		364 - 386
lacZ_a		398 - 250
pGEX_3_primer		51 - 29
Orf2		2486 - 1626

NOS terminator sequence:

ggatccatcgttcaaacatttggcaataaagtttcttaagattgaatcctgttgccggtcttgcgatgattatcatataatttctgttgaattacgttaagcatgtaataattaacatgtaatgcatgacgttgtttatgagatgggtttttatgattagagtcccgcaattatacatttaatacacgatagaaaacaaaatatagcgcgcaaactaggataaattatcgcgcgcggtgtcatctatgttactagtaatcgat

设计引物：

Forward primer: 5’ ggaGGATCCggatccatcgttcaaac 3’ (含BamH I 位点GGATCC及三个保护碱基)

Reverse primer: 5’ atcGAATTCATCGATTACTAGTAACATAG 3’ (含EcoR I 位点GAATTC及三个保护碱基)

请查一下NOS终止子序列内有没有这两个酶切点。如果没有，引物合成后，以任何一种pCAMBIA为模板都能扩增到该终止子序列。