藻酸盐包裹肿瘤细胞实验流程
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1. 将藻酸钠溶于无菌生理盐水,终浓度为 1.5%;
2. 收集培养的肿瘤细胞,用无血清的培养基洗涤1 次,将细胞沉淀重悬于1.5%藻酸钠溶液中;
3. 将上述肿瘤细胞悬浮液用 1 ml 加样枪缓慢滴入磁力搅拌的 250 mMCaCl2 溶液中,形成乳白色的藻酸盐小珠。继续静置于 250 mMCaCl2 中 30 min 即可 使用。以上操作步骤均在无菌条件下进行;
4. 将第 4 次免疫后 7 天的小鼠用苯巴比妥钠 0.1ml( 按 100 mg/kg 计) 腹腔注射麻醉,小鼠麻醉后置于解剖台上,切开背部皮肤,皮下植入 4 粒藻酸盐包裹 颗粒,缝合皮肤,外敷手术胶膜;5天以后, 小鼠经尾静脉注入100 μl ( 按 100 mg/kg计) FITC标记的葡聚糖(FITC-Dextran);
5. 20 min 后处死动物,取出藻酸盐颗粒,常温下加入1 ml 的生理盐水,剪碎研磨颗粒, 再加入1ml的生理盐水,混匀标本, 放置1 小时, 1500 rpm离心 5 min。取上清液用荧光酶标仪测定;
6. 用不同浓度的 FITC-Dextran 制备标准曲线。