藻酸盐包裹实验

 

藻酸盐包裹实验

1.      将藻酸钠溶于无菌生理盐水，终浓度为1.5%；

2.      收集培养的肿瘤细胞，用无血清的培养基洗涤1次，将细胞沉淀重悬于1.5%藻酸钠溶液中；

3.      将上述肿瘤细胞悬浮液用1 ml加样枪缓慢滴入磁力搅拌的250 mM CaCl₂ 溶液中，形成乳白色的藻酸盐小珠。继续静置于250 mM CaCl₂ 中30 min即可使用。以上操作步骤均在无菌条件下进行；

4.      将第4次免疫后7天的小鼠用苯巴比妥钠0.1ml (按100 mg/kg计) 腹腔注射麻醉，小鼠麻醉后置于解剖台上，切开背部皮肤，皮下植入4粒藻酸盐包裹颗粒，缝合皮肤，外敷手术胶膜；

5.      天以后，小鼠经尾静脉注入100 μl (按100 mg/kg计) FITC标记的葡聚糖(FITC-Dextran)；

6.      20 min后处死动物，取出藻酸盐颗粒，常温下加入1 ml的生理盐水，剪碎研磨颗粒，再加入1 ml的生理盐水,混匀标本，放置1小时，1500 rpm离心5 min。取上清液用荧光酶标仪测定；

7.      用不同浓度的FITC-Dextran制备标准曲线。