中性粒细胞移动功能的测定―琼脂糖平板法

试剂及材料

1. 琼脂糖和明胶

2. 趋化因子（制备见附注）

3. Giemsa染液

4. 显微测微器

操作方法

1. 称0.25g琼脂糖，加12.5ml蒸馏水，沸水内加热溶化，冷至47℃；

2. 另取Hanks液2ml，10%明胶25ml和蒸馏水8ml，混匀后加7%的NaHCO3 2滴；

3. 将二者混匀倒板。在琼脂板上打孔，孔径3mm，孔间距2～3mm；

4. 中央孔内加中性粒细胞悬液10μl，左侧孔内加10μl趋化因子，右侧孔内加10μl对照液；

5. 将琼脂糖板放入湿盒内，于37℃，5%CO2 条件下温育4～8h；

6. 待孔中液体干后用甲醇固定30min，琼脂糖膜用Giemsa染色。

结果分析

用显微测微器测量细胞从中央孔向左侧孔的移动距离A，以及向右侧孔的移动距离B，趋化指数为A/B。

附注:趋化因子的制备

1. 取酵母多糖500mg，加入50ml Hanks液中，煮沸1h；2000r/min离心20min， 弃上清。用Hanks液调整酵母多糖为50mg/ml，4℃保存；

2. 用前取1份酵母多糖和3份新鲜血清混合，37℃搅拌反应30min，离心弃上清；

3. 并用含0.1%明胶的Hanks液等体积稀释，即为趋化因子。也可用合成多肽（f-met-leu-phe，10～8mol/L，Sigma）作为趋化因子。