脂肪酶活性测定方法

问：向大家请教脂肪酶活力的测定方法、仪器、试剂。多谢指教！

答：可以考虑采用 橄 榄 油乳化液法测定脂肪酶的活力，具体步骤如下：取100 ml,三角瓶4个，每瓶加人5 mL磷酸缓冲液（pH= 7.5 , 0.02 5mol/1）和4m l，聚乙烯醇橄榄油乳化液，置于37 C水浴中保温5 min，然后在两个瓶中各加人1 MI.酶液。

从加人酶液开始精确计算时间，继续保温10 min，取出后立即加入95%乙醇5 ml,，以停止酶作用，再加酚酞指示剂3滴，用0.0 5m ol/I，的氢氧化钠滴定至溶液呈粉红色为止，另外两个锥形瓶不加酶液，也继续保温15 min后，立即取出，各加人15 MI 95%乙醇作为对照。

取平均值计算酶的活性或相对活性..酶活力定义为在37 C pH=7.5条件下，每分钟催化生成1 pmol脂肪酸所需的酶量为一个活力单位（U）。

答：还需要确定具体脂肪酶的性质，是酸性还是碱性，最适作用pH 以及温度，通过实验来确定，从而调整测定时磷酸缓冲液pH值，温度等具体条件。