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脂肪酶活性测定方法

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问:向大家请教脂肪酶活力的测定方法、仪器、试剂。多谢指教!

答:可以考虑采用 橄 榄 油乳化液法测定脂肪酶的活力,具体步骤如下:取100 ml,三角瓶4个,每瓶加人5 mL磷酸缓冲液(pH= 7.5 , 0.02 5mol/1)和4m l,聚乙烯醇橄榄油乳化液,置于37 C水浴中保温5 min,然后在两个瓶中各加人1 MI.酶液。

从加人酶液开始精确计算时间,继续保温10 min,取出后立即加入95%乙醇5 ml,,以停止酶作用,再加酚酞指示剂3滴,用0.0 5m ol/I,的氢氧化钠滴定至溶液呈粉红色为止,另外两个锥形瓶不加酶液,也继续保温15 min后,立即取出,各加人15 MI 95%乙醇作为对照。

取平均值计算酶的活性或相对活性..酶活力定义为在37 C pH=7.5条件下,每分钟催化生成1 pmol脂肪酸所需的酶量为一个活力单位(U)。

答:还需要确定具体脂肪酶的性质,是酸性还是碱性,最适作用pH 以及温度,通过实验来确定,从而调整测定时磷酸缓冲液pH值,温度等具体条件。

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