wish细胞的传代

wish细胞是上皮细胞， 人羊膜细胞 ，培养基我用的是最常见的1640（10％小牛血清，加双抗）。

1、细胞长满培养瓶时既要传代。我用胰酶和edta的混合液消化。用D-Hank's液配制成0.25%的胰酶。edta的终浓度是0.02%。

2、使用前37度预热，每个25ml培养瓶加9滴的胰酶和edta混合液，消化液的量可根据自己培养瓶的大小而定，原则就是能够盖满瓶底。加入胰酶和edta混合液以后，为使酶的活性最大，将培养瓶盖拧紧后放回培养箱中，5分钟左右即用含血清的培养基终止消化。

如果在室温情况下消化，时间相应加长，可以用手给培养瓶加温，是消化液发挥最大的作用。可以在显微镜下观察，当细胞界限已十分清楚，从梭形变圆，即已分离为单个细胞，且有少量细胞漂起，则要终止消化了。

3、将消化液倒掉，用eagle液洗涤一次。然后倒掉。

4、加少量1640，用吸管轻轻吹打。

5、吸1/3至1/4的细胞悬液接种至新的培养瓶，然后加8ml的新的细胞培养基，置37度5％的二氧化碳培养箱完成传代。