逆转录的怪问题

ouyangty247：我正在做rt-pcr，奇怪的是，我用的同一支RNA，同时逆转录好几管，所有的东西都是预混好再分装的。

PCR时，除cDNA外所有的东西也都是预混好再分装的，引物用的是GAPDH，再分别加入先前RT得到的cDNA，按理说不应该都是一样的么？可是跑胶后却发现有的有条带，有的就没有。做了好几次都是这样，为什么？？？太奇怪了！

我做的头都大了，不知道到底是哪出了问题，恳请大家多多帮忙！

丁香园网友yangbinxia认为：

如果你加的试剂都充分混匀尤其加前也要先混匀再取出的话，是不是你的PCR仪出了问题，PCR仪孔里不干净的话它的温度反应就不灵敏了，就可能出现你的情况，你可以拿酒精把孔擦一擦或还一台PCR仪试试看；有人说PCR就像魔鬼，你过一段时间再做的话一切又都正常了，我也遇到你的情况，最后象恶性循环一样什么都P不出来，放了一段时间再拿原来东西重作一切都正常了，很奇怪。