处女座实验狗都无法抵抗的慢病毒滴度标定方法

绝对定量时代——引领慢病毒行业新标准 

高大上的慢病毒是怎样炼成的（一）

 

慢病毒活性滴度用什么单位？

看 TU！看 TU！看 TU！

TU = transducing units，即每毫升中含有的具有生物活性的病毒颗粒数。其他的 VG/mL，VP/mL 都是所有病毒颗粒数，死的活的都算上，一片虚假繁荣，请自由玩儿去！

 

慢病毒活性滴度怎么标定最准？

绝对定量！绝对定量！绝对定量！

又绝对又定量的方法，准到不要不要的！再说了，这「绝对定量」是医疗级病毒产品的公认滴度检测方法，诺华、Juno，这些 CarT 大佬们都用！不准？不准的话 FDA 能认吗？

复杂又昂贵的方法，为了准，咱们忍啦！

1. 标准品检定绘制标准曲线，精确定量病毒基因组 DNA 拷贝数。
2. 测定插入细胞基因组的 5'LTR—3'LTR 病毒基因组拷贝数。
3. 工具细胞 293T 基因组中的病毒特征单拷贝基因 A 和宿主特征单拷贝基因 B。
4. TU=N  C / V =（初始细胞 / 感染病毒体积） × （2 × A 基因拷贝 / B 基因拷贝），计算感染效率。
5. 不要反转录，不要受 RNA 降解或反转录效率影响。
6. 如果病毒有荧光或者抗性，再结合表型联合判断。

 

慢病毒滴度标那么准，有用吗？

为啥细胞用慢病毒一感就死？

为啥细胞用慢病毒感染后会出现小黑点？

很可能是，过感染啦！过感染啦！过感染啦！

 

有没有先做预实验确定细胞的 MOI？有没有根据病毒滴度准确计算病毒用量？

越是高浓度高纯度的病毒，越是需要精确计算滴度，以避免感染不足或者过量感染，保证最好的细胞状态，以继续下游实验，这样才能省时省力省病毒。

最后，附赠感染预实验步骤详解，请叫我雷锋！