经验分享｜动物活体光学成像实验——荧光成像（二）【饲料】

上文中提到叶绿素，可能大家会觉得很奇怪，动物体内为什么会由叶绿素呢？其实，常规啮齿动物饲料中含有大量的紫花苜蓿，苜蓿中含有叶绿素。由于叶绿素及其代谢物聚集在肠道中，因此在小鼠腹部能够观察到较强的自发荧光，峰值波长约为 680 nm。肠道的自发荧光可能会掩盖定位于腹部或腹部附近的荧光探针的信号，也可能模拟探针在肠道中的排泄和/或积累。

不同成像条件下，不同饲料的自发荧光对比图

(Inoue Y, Izawa K, Kiryu S, Tojo A, Ohtomo K. Diet and abdominal autofluorescence detected by in vivo fluorescence imaging of living mice. Mol Imaging. 2008 Jan-Feb;7(1):21-7.)

上图为测定每种食物颗粒的荧光强度。纯化饲料（purified diet）在绿色区域荧光最强，其次是无苜蓿饲料（Alfalfa-free diet）和常规饲料（regular diet）。相比之下，远红光和 NIR 区荧光最强的是常规饲料，无苜蓿饲料荧光较弱，纯化饲料荧光最弱。因此，使用无苜蓿饲料，特别是纯化饲料，可以迅速减少肠道自身荧光，提高荧光成像信噪比。

应当方法：

1. 对于远红光和 NIR 区域的体内荧光成像，建议给实验动物喂食不含苜蓿的食物，以减少叶绿素及其代谢物产生的背景荧光；
2. 荧光成像前，对实验动物进行饥饿处理。