生化检测试剂盒的反应原理

一、反应曲线

首先，我们了解一下化学反应的时间与吸光度一个曲线图，可以划分为四个区：延迟区、等速区、过渡区和平衡区，如下图所示：

二、反应原理

对于延迟区来讲，无规律可寻，对于指标检测没有意义。

等速区对应的指标检测方法是速率法。速率法又称连续监测法，是在测定酶活性或用酶法测定代谢产物时，连续选取时间-吸光度曲线中线性期内4个以上测光点作为读数点，并以单位时间吸光度变化值计算结果。线性期就是此期间内各测光点之间的吸光度差值相等，此线性期对酶促反应的底物来说属于零级反应。其测光点一般设置在加入启动因子并孵育一段时间后开始，持续1-3min，一般应用于酶类项目，可以使用因数法来计算待测浓度。

生化检测原理示意图

过渡区对应是固定时间法，是终点法中存在一种特殊情况，指在时间-吸光度曲线上选择两个读数点，此两点既非反应初始吸光度亦非平衡点吸光度，这两点的吸光度差值用于结果计算。目的是解决某些化学反应的非特异性问题，提高准确度。

平衡区对应的是终点法，按测光点的个数分为：一点终点法、两点终点法。

一点终点法是指在反应到达平衡点，即在时间-吸光度曲线上吸光度不再改变时，选择一个测光点计算待测物质浓度。

两点终点法常应用于双试剂的测定项目中，多数第一试剂通常只含缓冲液等成分，它与样本一般不起特异性反应;因此在第二试剂加入前，选择一个测光点作为第一读数点，此时的吸光度相当于样品空白。加入第二试剂后待测物质起反应，并经过一定时间反应到达平衡点，此时选择第二个读数点，两读数点吸光度之差用于计算待测物质浓度。

两点法能有效消除样品溶血、黄疸、脂浊等造成的光吸收干扰。如：酶法测定葡萄糖、总胆固醇、甘油三酯、尿酸、肌酐，以及化学法测定总蛋白、总胆红素、直接胆红素、钙、磷、镁、铁等;并且都能在加入第二试剂后的2-5 min内达到反应终点。