核酸的紫外吸收

嘌呤碱和嘧啶碱具有共轭双键，使碱基、核苷、核苷酸和核酸在 240~290nm 的紫外波段有一强烈的吸收峰，因此核酸具有紫外吸收特性。 DNA 钠盐的紫外吸收在 260nm 附近有最大吸收值 ，其吸光率（ absorbance ）以 A₂₆₀ 表示， A₂₆₀ 是核酸的重要性质，在核酸的研究中很有用处。在 230nm 处为吸收低谷， RNA 钠盐的吸收曲线与 DNA 无明显区别。不同核苷酸有不同的吸收特性。所以可以用紫外分光光度计加以定量及定性测定。

实验室中最常用的是定量测定小量的 DNA 或 RNA 。对待测样品是否纯品可用紫外分光光度计读出 260nm 与 280nm 的 OD 值，因为蛋白质的最大吸收在 280nm 处，因此从 A₂₆₀ /A₂₈₀ 的比值即可判断样品的纯度。纯 DNA 的 A₂₆₀ /A₂₈₀ 应为 1.8 ，纯 RNA 应为 2.0 。样品中如含有杂蛋白及苯酚， A₂₆₀ /A₂₈₀ 比值即明显降低。不纯的样品不能用紫外吸收法作定量测定。对于纯的核酸溶液，测定 A₂₆₀ ，即可利用核酸的比吸光系数计算溶液中核酸的量，核酸的比吸光系数是指浓度为 1 μ g ／ mL 的核酸水溶液在 260nm 处的吸光率，天然状态的双链 DNA 的比吸光系数为 0.020 ，变性 DNA 和 RNA 的比吸光系数为 0.022 。通常以 1OD 值相当于 50 μ g ／ mL 双螺旋 DNA ，或 40 μ g ／ mL 单螺旋 DNA （或 RNA ），或 20 μ g ／ mL 寡核苷酸计算。这个方法既快速，又相当准确，而且不会浪费样品。对于不纯的核酸可以用琼脂糖凝胶电泳分离出区带后，经啡啶溴红染色而粗略地估计其含量。