核酸样品

很多球状蛋白均能在水溶液或盐溶液的表面形成不溶的变性薄膜，在适当的条件下这一薄膜可以成为单分子层，由伸展的肽链构成为一个分子网。当核酸分子与该蛋白质单分子膜作用时会由于蛋白质的氨基酸碱性侧链基团的作用，使得核酸从三维空间结构的溶液构型吸附于肽链网而转化为二维空间的构型，并从形态到结构均能保持一定程度的完整性。最后将吸附有核酸分子的蛋白质单分子膜转移到载膜上，用负染等方法增加样品的反差后置电镜观察。

1. 将质粒 pBR322 与一碱性球状蛋白溶液（一般为细胞色素 c）混合。使浓度分别达到 0.5～2 mg/ml 和 0.1 mg/ml，并加入终浓度为 0.5～1 mol/L 的醋酸铁和 1 mmol/L 的乙二胺四乙酸二钠，成为展开溶液， pH 为 7.5。

2. 在一干净的平皿中注入一定下相溶液（蒸馏水或 0.1～0.5mol/L 的醋酸铁溶液），并在液面上加入少量滑石粉。将一干净载玻片斜放于平皿中，用微量注射器或移液枪吸取 50 μl 的展开溶液，在离下相溶液表面约 1 cm 左右的载玻片上前后摆动，滴于载玻片的表面，此时可看到滑石粉层后退，说明蛋白质单分子膜逐渐形成，整个过程约需 2～3 min。

3. 单分子膜形成后，用电镜银子取一覆有支持膜的载网，使支持膜朝下，放置于离单分子膜前沿 1 cm 或距离载玻片 0.5 cm 的膜表面上，并用镊子即刻捞起。单分子膜即吸附于支持膜上，多余的液体可用小片滤纸吸去，也可将载网直接漂浮于无水乙醇中 10～30 s。

4. 将载有单分子膜的载网置于 10^-3～10^-5mol/L 的醋酸铀乙醇溶液中染色约 30 s（此步可在用乙醇脱水时同时进行），或用旋转投影的方法将金属喷镀于核酸样品的表面。也可将二种方法结合起来，在染色后再进行投影，其效果有时比单独使用一种方法更好一些。

1. 在单分子膜形成时，整个装置最好用玻璃罩等物盖住，以防操作人员的呼吸和旁人走动等引起气流的影响以及灰尘等脏物的污染。

2. 在展开溶液中可适量加入一些与核酸量相差不过悬殊的指示标本，如烟草花叶病病毒等，以利于鉴定单分子膜的展开及后面转移的好坏。

3. 在蛋白形成单分子膜时，溶液中的核酸分子也同时分布于蛋白质基膜中间，并略受蛋白质肽链的包裹。理论计算及实验证明，当 1 mg 的蛋白质展开成良好的单分子膜时，其面积约为 1 m²。因而可根据最后形成的单分子膜面积的大小估计其好坏程度。如果面积过小。说明形成的膜并非单分子层，因而核酸就有局部或全部被膜包裹的危险，使整个核酸分子消失或反差变坏。

4. 载玻片倾斜的角度决定了展开液下滑至下相溶液的速度，并对单分子膜的形成质量有影响，经验证明倾斜度以 15° 左右为宜。