交互扣除RNA差别显示技术（RSDD）

交互扣除ＲＮＡ差别显示技术（RSDD）是由Kang等于1998年最新提出的结合扣除杂交和ＲＮＡ差别显示两项技术发展而出的一种有效、快速分离差别表达基因序列的方法。该方法应用于肿瘤进展的研究，可鉴定和克隆已知的和高比率(>65%)的未知序列，这包括分别作为增强和抑制表达进展功能的cDNAs，分别称为增强进展基因（PEGen）和抑制进展基因（PSGen）。1999年通过交互扣除RNA差别显示技术已鉴定出了16条差别表达的基因，其中有5条为未知的PEGen，6条为未知的PSGen。该方法主要由三部分组成：
交互扣除（reciprocal subtraction）：首先是要获得两个具有差别基因表达的细胞系的cDNA文库，然后将这两个文库进行交互扣除杂交，从而获得两个扣除cDNA文库。随后通过体内剪切得到质粒cDNA文库；
差异显示（differentialdisplay）：由交互扣除cDNA文库获得的纯化质粒可直接进行差异显示，这包括PCR扩增(加入3种3′锚定引物和18种5′随机引物)和进行5%序列胶电泳并切割回收差异显示条带；
表达分析（expression analysis）：运用反向Northern印迹分析（reverse Northern blotting）和Northern Blot分析鉴定经再扩增的DNA片段的差异表达。反向Northern Blotting是将经差异显示得到的扩增后的DNA片段转膜，并分别与来自两个不同细胞系总RNA经反转录制备的32P标记的cDNA第一链探针(reverse transcribed 32P-cDNA prob)进行杂交。234条再次扩增的DNA片段中有181条被探测到(77%)，其差异表达显示水平比两种细胞间Northern blot分析要高1.8倍。最后经Northern blotting分析得到两种细胞系差别表达的DNA片段被克隆到载体上进行测序分析。RSDD目前被证实对于有效且快速鉴定发生在复杂基因组以及细胞生理变化中差异表达的基因是很有价值的。