实验15 血红蛋白含量的测定

实验15 血红蛋白含量的测定

　　【目的要求】

　　掌握比色法测定血红蛋白含量的方法。

　　【基本原理】

　　测定血红蛋白含量的方法很多，实验常用比色法。其原理是在一定量的血液中，血红蛋白经少量盐酸的作用，使亚铁血红素变成高铁血红素，呈现较稳定的棕色。用水稀释后与标准色比较，求出每100ml血液中所含的血红蛋白克数。正常成年男子每100ml血液平均含14.4g，女子为13.1g。

　　【实验器材】

　　血红蛋白计、0.1mol/LHCl、刺血针、滤纸片、酒精棉球、乙醚、95%酒精、蒸馏水。

　　【方法与步骤】

　　1．血红蛋白计包括①标准比色架，架的两侧镶有两个棕色标准玻璃色柱。②血红蛋白稀释管，有方形也有圆形的。两侧有刻度，一侧以g为计数单位，对侧以百分率计，按我国情况，是以每100ml血液内含血红蛋白14.5g为100%。③20mm³ 血红蛋白吸管，还有玻璃棒、滴管（图3-2）。

　　2．用滴管加0.1mol/LHCl于血红蛋白稀释管内，到刻度10处。

　　3．用刺血针刺破指尖采血，血滴宜大些。用血红蛋白吸管的尖端接触血滴，吸血至刻度20mm³ 处（0.02ml）。

　　4．用滤纸片或棉球擦净吸管口周围的血液，将吸管插入血红蛋白稀释管的盐酸内，轻轻吹出血液至管底部，反复吸入并吹出稀释管内上层的盐酸，洗涤吸管多次，使吸管内的血液完全洗入稀释管内。摇匀或用小玻璃棒搅匀后，放置10min，使盐酸与血红蛋白充分作用。

　　5．把稀释管插入标准比色架两色柱中央的空格中，使无刻度的两侧面位于空格的前后方，便于透光和比色。

　　6．用滴管向稀释管内逐滴加入蒸馏水（每加一滴要搅拌），边滴边观察颜色，直至颜色与标准玻璃色柱相同为止。稀释管上液面的刻度读数即为每100ml血液血红蛋白的克数。

　　【注意事项】

　　1．吹血液入稀释管及洗净吸管时，不宜用力过猛。

　　2．蒸馏水需逐滴加入，多做几次比色，以免稀释过量。每次比色时，应将搅拌用的玻璃棒取出，以免影响比色。

　　3．由于操作过程过长而造成吸管内血液凝固，堵塞管孔时，则要按下列溶液的顺序重复冲洗吸管，即用水→95%酒精→乙醚或丙酮。