实验4 疟原虫及草履虫

实验4 疟原虫及草履虫

　　一、目的

　　（一）了解疟原虫的生活史和各期的基本形态。认识几种有经济价值的孢子虫。通过这些代表动物了解孢子纲的主要特征。

　　（二）通过草履虫及其他纤毛虫的观察，了解纤毛纲的主要特征并认识一些习见的种类。

　　二、内容

　　（一）间日疟原虫生活史的观察（或示范）。

　　（二）观察兔艾美球虫的卵囊。

　　（三）草履虫的观察。

　　（四）示范：兔艾美球虫的生活史各阶段（除卵囊外）、粘孢子虫、游仆虫、棘尾虫、钟虫或喇叭虫。

　　三、实验材料和用具

　　疟原虫涂片标本、新鲜兔粪、兔（患球虫病）小肠切片、粘孢子虫寄生的鱼、培养的草履虫及几种常见的纤毛虫。

　　显微镜、载玻片、盖玻片、解剖器、甘油生理盐水、吸管、牙签、新鲜兔粪、0．7％和0．9％生理盐水、棉花、吸水纸、5％的冰醋酸。

　　四、实验操作及观察

　　疟原虫生活史各期标本需在油物镜下观察，要特别注意油物镜的使用方法，勿损坏玻片标本。若为示范观察，学生有看不清者，请教师指导观察。不要自己移动标本，以免影响其他同学观察。

　　草履虫的观察：因其游动快，需于载玻片上加少许撕松的棉花纤维阻拦。注意使棉花纤维之间的孔隙大小较均匀，成一薄层，加含草履虫液适量（棉花纤维及液体量均不宜多），加盖片后，将虫体限制在纤维孔隙间。观察时将亮度稍调暗一些，多仔细观察，调到适宜程度，可见到虫体纤毛有节律地摆动。

　　（一）间日疟原虫（Plasmodium vivax）：生活史各期。根据自己实验室的条件决定，学生自己观察或示范。

　　1．观察油物镜下的间日疟病人血液染色涂片：涂片中红色圆形的是红细胞。红细胞内各期疟原虫的细胞质被染成蓝色，细胞核被染成红色。

　　2．仔细观察下列各期：

　　滋养体：裂殖子进入红细胞后，首先发育成环状体，个体很小，中间有一大的空泡，核偏在一边，周围有细胞质，很像戒指，因而也称为环状滋养体，然后再逐渐发育成形态不规则的、较大的阿米巴状的滋养体，即大滋养体。

　　裂殖体：滋养体进一步发育，细胞核分裂成几块，而细胞质尚未分裂。此期的疟原虫几乎充满整个红细胞。

　　裂殖子：裂殖体的细胞质分裂，包围在每个核的周围，这些卵圆形的小个体称为裂殖子。

　　配子母细胞（即配子体）：也是由裂殖子发育来的。

　　大配子母细胞（大配子体）：充满红细胞。细胞核偏在一边，核质较紧密，疟色粒比较粗大。

　　小配子母细胞（小配子体）：与大配子体的不同点是细胞核疏松，位于中部。色素颗粒比较细小。

　　结合挂图复习疟原虫有性世代的发育过程。

　　（二）兔艾美球虫卵囊的观察：球虫借卵囊传播。在载玻片上滴一滴甘油生理盐水，用牙签挑取兔的新鲜粪便少许，涂于甘油生理盐水内，充分均匀混合，盖上盖玻片，在低倍镜下观察，亮度要稍暗一些。

　　兔艾美球虫的卵囊为卵形，卵囊壁较厚，里边有一个圆形的卵细胞。在合适的外界环境中经发育（约24h），卵囊内有清楚可见的4个孢子，每个孢子内有2个子孢子。

　　卵囊形成有何意义，并结合示范标本，了解球虫生活史的特点。

　　（三）大草履虫（Paramecium caudatum）的观察：为限制草履虫的迅速游动以便观察，可将少许棉花撕松，放在载玻片上，滴上草履虫培养液，盖好盖玻片，在低倍镜下观察。如果还不能拦阻草履虫，则取吸水纸放在盖玻片的一侧，将水吸去一些（注意不要吸干），再进行观察。

　　首先分辨出前、后端。前端较圆，后端较尖，然后观察草履虫怎样运动。

　　选择一个比较清晰而又不太活动的草履虫观察其内部构造。虫体最外为表膜，有弹性，故当其穿过棉纤维时，体形可以改变。将亮度调暗一些，可看到虫体满覆纤毛，时时在摆动。表膜内是透明无颗粒的外质。外质内有与表膜垂直排列的折光性强的椭圆形的刺丝泡。外质里面是颗粒状的内质。

　　从虫体前端起，有一斜向后行直达体中部的凹沟是口沟，在口沟的后端有胞口，胞口下有一导入内质的短管为胞咽。胞咽内有颤动的纤毛，具运输食物的功能。

　　内质里有大小不同的食物泡，在虫体的前端和后端各有一个圆的亮泡，此即为伸缩泡。当伸缩泡缩小时，可见周围有6、7个放射状的长形的透明小管，即收集管。注意前、后端伸缩泡之间及伸缩泡与收集管之间收缩时有何规律？它们有何功用？

　　大草履虫有两个细胞核。一大核一小核在内质中央。生活时小核不易见。在盖玻片一边滴一滴5％的冰醋酸，另一边用吸水纸吸水，过2～3min后在光线比较充足的情况下，用低倍镜可观察到虫体的中部被染成黄白色。呈肾形的结构为大核。转高倍镜可见大核凹处有一个点状的结构，即为小核。

　　五、示范

　　（一）兔艾美球虫（Eimeria）的生活史：观察兔的小肠横切片，在小肠上皮细胞中可以找到以下生活史阶段的细胞。

　　裂殖体：体大而圆，多核。

　　大配子母细胞：周围有染色较深的颗粒，中间有一个深色的细胞核。

　　小配子母细胞：发育过程中形成许多小而数量多的细胞核。

　　（二）粘孢子虫（Myxidium）的观察：观察有粘孢子虫寄生的鱼，在鱼的体表与鳃等处有一些隆起的小白点，这些地方即有粘孢子虫寄生。用小刀刮下小白点，用0．7％的生理盐水作成临时装片，在显微镜下观察。粘孢子虫的孢子一般是椭圆形的。可辨认出极囊及其中的极丝。

　　（三）草履虫的生殖：

　　无性生殖：草履虫的无性生殖是横裂，注意观察细胞核的分裂情况。

　　有性生殖：草履虫的有性生殖是接合生殖，注意二虫在何处接合。

　　（四）游仆虫（Euplotes）：体卵圆形，较小，棘毛限于腹面。

　　（五）棘尾虫（Stylonychia）：体椭圆形，腹面有棘毛。尾端有3条棘毛。

　　（六）喇叭虫（Stentor）：体大，伸展时呈喇叭形，能收缩，口缘小膜带的纤毛发达。

　　（七）钟虫（Vorticella）：体形如钟，有柄附于水草或其他物体上。纤毛只限于口缘小膜带，虫体其他部分无纤毛。能收缩。（八）小瓜虫（Ichthyophthirius）：体圆球形，全身布满纵行排列的纤毛，大核呈马蹄形。

　　六、