高氏1号培养基的制备

 

实验二十 高氏1号培养基的制备

 

　　一、目的要求

　　通过对高氏1号培养基的制备，掌握配制合成培养基的一般方法。

　　二、基本原理

　　高氏1号培养基是分离和培养放线菌的合成培养基。这种培养基是由可溶性淀粉（作为碳源），KNO3（作为氮源），NaCl、K₂ HPO₄ ·3H₂ O、MgSO₄ ·7H₂ O（作为无机盐，为微生物提供钠、钾、磷、镁、硫等离子）和FeSO₄ · 7H₂ O（作为微生物的微量元素，提供铁离子）等组成。由于磷酸盐和镁盐相混合时产生沉淀，因此，在混合培养基成分时，一般是按配方的顺序依次溶解各成分。对于象FeSO₄ ·7H₂ O这样的微量成分，则可预先配成高浓度的贮备液，在配制培养基时按需要加入一定的量。

　　高氏1号培养基配方如下：

　　可溶性淀粉 20g

　　NaCl 0．5g

　　KNO₃ 1g

　　K₂ HPO₄ ·3H₂ O 0．5g

　　MgSO₄ · 7H₂ O 0．5g

　　FeSO₄ ·7H₂ O 0．01g

　　琼脂 15—20g

　　水 1000ml

　　pH 7．4—7．6

　　三、器材

　　可溶性淀粉，KNO₃ ，NaCl，K₂ HPO₄ ·3H₂ O，MgSO₄ ·7H₂ O， FeSO₄ ·7H₂ O，琼脂， 1mol/L NaOH， 1mol/ LHCl；

　　试管，三角烧瓶，烧杯，量筒，玻棒，培养基分装器，扭力天平，牛角匙，高压蒸汽灭菌锅，pH试纸（pH5．5—9．0），棉花，牛皮纸，记号笔，麻绳，纱布等。

　　四、操作步骤

　　1．称量和溶化

　　按配方先称取可溶性淀粉，放入小烧杯中，并用少量冷水将淀粉调成糊状，再加入少于所需水量的沸水中，继续加热，使可溶性淀粉完全溶化。再称取其他各成分依次逐一溶化。对微量成分FeSO₄ ·7H₂ O可先配成高浓度的贮备液后再加入，方法是先在100ml水中加入1g的FeSO₄ ·7H₂ O配成0．01g/ml，再在1000ml培养基中加入1ml的0．01g/ml的贮备液即可。待所有药品完全溶解后，补充水分到所需的总体积。如要配制固体培养基，其溶化过程同实验十九。

　　2．pH调节、分装、包扎、灭菌及无菌检查同实验十九。

　　五、实验报告

　　思考题

　　（1）什么叫天然培养基？什么叫合成培养基？

　　（2）配制合成培养基加入微量元素时最好用什么方法加入？天然培养基为什么不需要另加微量元素？