免疫电泳

 

实验五十八 免疫电泳

 

　　一、目的要求

　　学习免疫电泳的一般原理与方法。

　　二、基本原理

　　免疫电泳的基本原理是将电泳和琼脂免疫扩散结合起来应用，即先将蛋白质抗原在琼脂内进行电泳，使分离成不同的电泳区带，然后在一定距离的抗体槽内加入抗血清，使进行免疫扩散沉淀反应，这样，每一电泳区带又可能产生一个以上的沉淀线条。因而此法克服了单纯琼脂扩散方法中的沉淀线重叠成束，不易鉴别的缺点，大大提高了琼脂扩散试验的分析能力。

　　三、器材

　　某种可溶性抗原和相应抗体，例如鸡血清、鹅血清和鸡血清的免疫血清；

　　1％离子琼脂， pH8．6离子强度0．075mol/L巴比妥缓冲液（配法见附录Ⅲ）；

　　 电泳仪，电泳槽，打孔器，2mm直径的圆形薄壁金属管，开琼脂长槽用的手术小刀，毛细滴管或微量加样器，注射针头等。

　　四、操作步骤

　　1．取清洁无划痕的普通载玻片，放在水平位置。

　　2．用刻度吸管吸取溶化并已冷至50—60℃的1％离子琼脂3．5—4ml左右，加在上述载玻片上，使均匀布满玻片，待凝固。

　　3．用金属圆形管按图XIII-13打孔，用注射针头挑去琼脂。

 

　　4．用毛细滴管或微量加样器在上孔加鸡血清，下孔加鹅血清。

　　5．电泳 将琼脂板移至电泳槽上，电泳槽中放pH8．6离子强度0．075mol/L的巴比妥缓冲液，琼脂板的两端各用四层纱布与缓冲液搭桥。接通电源，电流为4—6mA/cm，电压为10—12V/cm。电泳时间为45分钟至1．5小时，亦可在抗原中加些溴酚蓝作为标志，当溴酚蓝泳动到距琼脂板末端1cm处，即关闭电源。

　　6．取出琼脂板，用手术小刀按图XIII-13在中央挖一长槽，用注射针头挑去琼脂。

　　7．在长槽中加入抗鸡血清的免疫血清，然后将琼脂板放入内有几层湿纱布的带盖搪瓷盘中，37℃下扩散24小时。

　　五、实验报告

　　1．结果

　　绘图表示琼脂玻片上出现的沉淀线。

　　2．思考题

　　（1）如果所用抗原抗体是鸡血清、鹅血清和抗鸡血清的免疫血清，从所得结果看，鸡血清与鹅血清有无共同抗原？

　　（2）免疫电泳与双向免疫扩散比较，哪个方法敏感？为什么？