附录I 染色液的配制
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附录I 染色液的配制
一、吕氏(Loeffler)碱性美蓝染液 (实验6,53)
A液:美蓝(methylene blue) 0.6g
95%酒精 30ml
B液:KOH 0.01g
蒸馏水 100ml
分别配制A液和B液,配好后混合即可。
二、齐氏 (Ziehl)石炭酸复红染色液 (实验6)
A液:碱性复红(basic fuchsin) 0.3g
95%酒精 10ml
B液:石炭酸 5.0g
蒸馏水 95ml
将碱性复红在研钵中研磨后,逐渐加入95%酒精,继续研磨使其溶解,配成A液。
将石炭酸溶解于水中,配成B液。
混合A液及B液即成。通常可将此混合液稀释5—10倍使用,稀释液易变质失效,一次不宜多配。
三、革兰氏 (Gram)染色液 (实验7)
1.草酸铵结晶紫染液
A液:结晶紫(crystal violet) 2g
95%酒精 20ml
B液:草酸铵(ammonium oxalate) 0.8g
蒸馏水 80ml
混合A、B二液,静置48小时后使用。
2.卢戈氏(Lugol)碘液
碘片 1.0g
碘化钾 2.0g
蒸馏水 300ml
先将碘化钾溶解在少量水中,再将碘片溶解在碘化钾溶液中,待碘全溶后,加足水分即成。
3.95%的酒精溶液。
4.番红复染液
番红(safranine O) 2.5g
95%酒精 100ml
取上述配好的番红酒精溶液10ml与80ml蒸馏水混匀即成。
四、芽孢染色液 (实验8)
1.孔雀绿染液
孔雀绿(malachite green) 5g
蒸馏水 100ml
2.番红水溶液
番红 0.5g
蒸馏水 100ml
3.苯酚品红溶液
碱性品红 11g
无水酒精 100ml
制法取上述溶液10ml与100ml5%的苯酚溶液混合,过滤备用。
4.黑色素(nigrosin)溶液
水溶性黑色素 10g
蒸馏水 100ml
称取10g黑色素溶于100ml蒸馏水中,置沸水浴中30分钟后,滤纸过滤
二次,补加水到100ml,加0.5ml甲醛,备用。
五、荚膜染色液 (实验9)
1.黑色素水溶液
黑色素 5g
蒸馏水 100ml
福尔马林(40%甲醛) 0.5ml
将黑色素在蒸馏水中煮沸5分钟,然后加入福尔马林作防腐剂。
2.番红染液
与革兰氏染液中番红复染液相同。
六、鞭毛染色液 (实验10)
A液:单宁酸 5g
FeCl3 1.5g
蒸馏水 100ml
福尔马林(15%) 2.0ml
NaOH(1%) 1.0ml
配好后,当日使用,次日效果差,第三日则不宜使用。
B液:AgNO3 2g
蒸馏水 100ml
待AgNO3 溶解后,取出10ml备用,向其余的90mlAgNO3 中滴入浓NH4 ON,使之成为很浓厚的悬浮液,再继续滴加NH4 OH,直到新形成的沉淀又重新刚刚溶解为止。再将备用的10mlAgNO3 慢慢滴入,则出现薄雾,但轻轻摇动后,薄雾状沉淀又消失,再滴入AgNO3 ,直到摇动后仍呈现轻微而稳定的薄雾状沉淀为止。如所呈雾不重,此染剂可使用一周,如雾重,则银盐沉淀出,不宜使用。
七、富尔根氏核染色液 (实验11)
1.席夫氏(Schiff)试剂
将1g碱性复红加入200ml煮沸的蒸馏水中,振荡5分钟,冷至50℃左右过滤,再加入1mol/LHC120ml,摇匀。待冷至25℃时,加Na2 S2 O5 (偏重亚硫酸钠)3g,摇匀后装在棕色瓶中,用黑纸包好,放置暗处过夜,此时试剂应为淡黄色(如为粉红色则不能用),再加中性活性炭过滤,滤液振荡1分钟后,再过滤,将此滤液置冷暗处备用(注意:过滤需在避光条件下进行)。
在整个操作过程中所用的一切器皿都需十分洁净、干燥,以消除还原性物质。
2.Schandium固定液
A液:饱和升汞水溶液
50ml升汞水溶液加95%酒精25ml混合即得。
B液:冰醋酸
取A液9毫升 B液1毫升,混匀后加热至60℃。
3.亚硫酸水溶液
10%偏重亚硫酸钠水溶液5ml,1mol/LHCl5ml,加蒸馏水100ml混合即得。
八、 Bouin氏固定液 (实验12)
苦味酸饱和水溶液 75ml
福尔马林(40%甲醛) 25ml
冰醋酸 5ml
1g苦味酸可制成75ml饱和水溶液。
先将苦味酸溶解成水溶液,然后再加入福尔马林和冰醋酸摇匀即成。
九、乳酸石炭酸棉蓝染色液 (实验16)
石炭酸 10g
乳酸(比重1.21) 10ml
甘油 20ml
蒸馏水 10ml
棉蓝(cottonblue) 0.02g
将石炭酸加在蒸馏水中加热溶解,然后加入乳酸和甘油,最后加入棉蓝,使其溶解即成。
十、瑞氏 (Wright)染色液 (实验53)
瑞氏染料粉末 0.3g
甘油 3ml
甲醇 97ml
将染料粉末置于干燥的乳缽内研磨,先加甘油,后加甲醇,放玻璃瓶中过夜,过滤即可。
十一、美蓝 (Levowitz-Weber)染液 (实验62)
在52ml95%酒精和44ml四氯乙烷的三角烧瓶中,慢慢加入0.6g氯化美蓝(met hylene blue chloride),旋摇三角烧瓶,使其溶解。放5—10℃下,12—24小时,然后加入4ml冰醋酸。用质量好的滤纸如WhatmanNo.42或与之同质量的滤纸过滤。贮存于清洁的密闭容器内。