微生物常用染色液的配制
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一、吕氏(Loeffler)碱性美蓝染液
A液:美蓝(methyleneblue)0.6 g
95%酒精30 ml
B液:KOH 0.01 g
蒸馏水:100 ml
分别配制A液和B液,配好后混合即可。
二、齐氏(Ziehl)石炭酸复红染色液
A液:碱性复红(basicfuchsin)0.3 g
95%酒精 10 ml
B液:石炭酸 5.0 g
蒸馏水 95 ml
将碱性复红在研钵中研磨后,逐渐加入95%酒精,继续研磨使其溶解,配成A液。
将石炭酸溶解于水中,配成B液。
混合A液及B液即成。通常可将此混合液稀释5-10倍使用,稀释液易变质失效,一次不宜多配。
三、革兰氏(Gram)染色液
1. 草酸铵结晶紫染液
A液:结晶紫(crystalviolet)2 g
95%酒精20ml
B液:草酸铵(ammoniumoxalate)0.8 g
蒸馏水80 ml
混合A、B二液,静置48小时后使用。
2. 卢戈氏(Lugol)碘液
碘片1.0 g
碘化钾2.0 g
蒸馏水300 ml
先将碘化钾溶解在少量水中,再将碘片溶解在碘化钾溶液中,待碘全溶后,加足水分即成。
3. 95%的酒精溶液。
4. 番红复染液
番红(safranineO)2.5 g
95%酒精 100 ml
取上述配好的番红酒精溶液10 ml 与80 ml 蒸馏水混匀即成。
四、芽孢染色液
1. 孔雀绿染液
孔雀绿(malachitegreen)5 g
蒸馏水 100 ml
2. 番红水溶液
番红 0.5 g
蒸馏水 100 ml
3. 苯酚品红溶液
碱性品红 11 g
无水酒精 100 ml
制法取上述溶液10 ml 与100 ml 5%的苯酚溶液混合,过滤备用。
4. 黑色素(nigrosin)溶液
水溶性黑色素10 g
蒸馏水 100 ml
称取10 g 黑色素溶于100 ml 蒸馏水中,置沸水浴中30分钟后,滤纸过滤
二次,补加水到100 ml,加0.5 ml 甲醛,备用。
五、荚膜染色液
1. 黑色素水溶液
黑色素 5 g
蒸馏水 100 ml
福尔马林(40%甲醛)0.5 ml
将黑色素在蒸馏水中煮沸5分钟,然后加入福尔马林作防腐剂。
2. 番红染液
与革兰氏染液中番红复染液相同。
六、鞭毛染色液
A液:单宁酸5 g
FeCl3 1.5 g
蒸馏水 100 ml
福尔马林(15%)2.0 ml
NaOH(1%)1.0 ml
配好后,当日使用,次日效果差,第三日则不宜使用。
B液:AgNO3 2 g
蒸馏水 100 ml
待AgNO3溶解后,取出10 ml 备用,向其余的90 ml AgNO3中滴入浓NH4ON,使之成为很浓厚的悬浮液,再继续滴加NH4OH,直到新形成的沉淀又重新刚刚溶解为止。
再将备用的10ml AgNO3慢慢滴入,则出现薄雾,但轻轻摇动后,薄雾状沉淀又消失,再滴入AgNO3,直到摇动后仍呈现轻微而稳定的薄雾状沉淀为止。如所呈雾不重,此染剂可使用一周,如雾重,则银盐沉淀出,不宜使用。
七、富尔根氏核染色液
1. 席夫氏(Schiff)试剂
将1 g碱性复红加入200 ml 煮沸的蒸馏水中,振荡5分钟,冷至50℃左右过滤,再加入1 mol/L HCl 20 ml,摇匀。待冷至25℃时,加Na2S2O5(偏重亚硫酸钠) 3 g,摇匀后装在棕色瓶中,用黑纸包好,放置暗处过夜,此时试剂应为淡黄色(如为粉红色则不能用),再加中性活性炭过滤,滤液振荡1分钟后,再过滤,将此滤液置冷暗处备用(注意:过滤需在避光条件下进行)。
在整个操作过程中所用的一切器皿都需十分洁净、干燥,以消除还原性物质。
2. Schandium固定液
A液:饱和升汞水溶液
50 ml 升汞水溶液加95%酒精25 ml 混合即得。
B液:冰醋酸
取A液9毫升+B液1毫升,混匀后加热至60℃。
3. 亚硫酸水溶液
10%偏重亚硫酸钠水溶液5 ml,1 mol/L HCl 5 ml,加蒸馏水100 ml 混合即得。
八、Bouin氏固定液
苦味酸饱和水溶液75 ml
福尔马林(40%甲醛)25 ml
冰醋酸5 ml
1 g 苦味酸可制成75 ml 饱和水溶液。
先将苦味酸溶解成水溶液,然后再加入福尔马林和冰醋酸摇匀即成。
九、乳酸石炭酸棉蓝染色液
石炭酸10 g
乳酸(比重1.21)10 ml
甘油 20 ml
蒸馏水 10 ml
棉蓝(cottonblue)0.02 g
将石炭酸加在蒸馏水中加热溶解,然后加入乳酸和甘油,最后加入棉蓝,使其溶解即成。
十、瑞氏(Wright)染色液
瑞氏染料粉末 0.3 g
甘油 3 ml
甲醇 97 ml
将染料粉末置于干燥的乳缽内研磨,先加甘油,后加甲醇,放玻璃瓶中过夜,过滤即可。
十一、美蓝(Levowitz-Weber)染液
在52 ml 95%酒精和44 ml 四氯乙烷的三角烧瓶中,慢慢加入0.6 g 氯化美蓝(methylenebluechloride),旋摇三角烧瓶,使其溶解。放5~10℃下,12~24小时,然后加入4 ml 冰醋酸。用质量好的滤纸如WhatmanNo.42或与之同质量的滤纸过滤。贮存于清洁的密闭容器内。