附录Ⅱ 培养基的配制

 

附录Ⅱ 培养基的配制

 

　　一、牛肉膏蛋白胨培养基 (培养细菌用)

　　牛肉膏 3g

　　蛋白胨 10g

　　NaCl 5g

　　琼脂 15—20g

　　水 1000ml

　　pH 7．0—7．2

　　1．05kg/cm² 　，121．3℃灭菌20分钟。

　　二、淀粉琼脂培养基 (高氏1号培养基，培养放线菌用)

　　可溶性淀粉 20g

　　KNO₃ 　 1g

　　NaCl 0．5g

　　K₂ 　HPO₄ 　 0．5g

　　MgSO₄ 　 0．5g

　　FeSO₄ 　 0．01g

　　琼脂 20g

　　水 1000ml

　　pH 7．2—7．4

　　配制时，先用少量冷水，将淀粉调成糊状，在火上加热，边搅拌边加水及其他成分，溶化后，补足水分至1000ml。1．05kg/cm² 　，121．3℃灭菌20分钟。

　　三、查氏培养基 (培养霉菌用，实验16)

　　NaNO₃ 　 2g

　　K₂ 　HPO₄ 　 1g

　　KCl 0．5g

　　MgSO₄ 　 0．5g

　　FeSO₄ 　 0．01g

　　蔗糖 30g

　　琼脂 15—20g

　　水 1000ml

　　pH 自然

　　1．05kg/cm² 　，121．3℃灭菌20分钟。

　　四、马丁氏 (Martin)琼脂培养基 (分离真菌用)

　　葡萄糖 10g

　　蛋白胨 5g

　　KH₂ 　PO₄ 　 1g

　　MgSO₄ 　·7H₂ 　O 0．5g

　　1/3000孟加拉红(rose bengal，玫瑰红水溶液)

　　100ml

　　琼脂 15—20g

　　pH 自然

　　蒸馏水 800ml

　　0．56kg/cm² 　(8磅/英寸² 　)，112．6℃灭菌30分钟。

　　临用前加入0．03%链霉素稀释液100ml，使每毫升培养基中含链霉素30μg。

　　五、马铃薯培养基 (实验16)

　　马铃薯 200g

　　蔗糖(或葡萄糖) 20g

　　琼脂 15—20g

　　水 1000ml

　　pH 自然

　　马铃薯去皮，切成块煮沸半小时，然后用纱布过滤，再加糖及琼脂，溶化后补足水至1000ml。1．05kg/cm² 　，121．3℃灭菌20分钟。

　　六、麦芽汁琼脂培养基 (实验15)

　　1．取大麦或小麦若干，用水洗净，浸水6—12小时，置15℃阴暗处发芽，上盖纱布一块，每日早、中、晚淋水一次，麦根伸长至麦粒的两倍时，即停止发芽，摊开晒干或烘干，贮存备用。

　　2．将干麦芽磨碎，一份麦芽加四份水，在65℃水浴锅中糖化3—4小时，糖化程度可用碘滴定之。

　　3．将糖化液用4—6层纱布过滤，滤液如混浊不清，可用鸡蛋白澄清，方法是将一个鸡蛋白加水约20ml，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。

　　4．将滤液稀释到5—6波美度，pH约6．4，加入2%琼脂即成。

　　1．05kg/cm² 　，121．3℃灭菌20分钟。

　　七、葡萄糖-醋酸盐培养基 (实验15)

　　葡萄糖 1g

　　酵母浸膏 2．5g

　　醋酸钠 8．2g

　　琼脂 15g

　　蒸馏水 1000ml

　　pH 4．8

　　分装试管，0．70kg/cm² 　(10磅/英寸² 　)，115．2℃灭菌20分钟后制成斜面。

　　八、半固体肉膏蛋白胨培养基 (实验26)

　　肉膏蛋白胨液体培养基 100ml

　　琼脂 0．35—0．4g

　　pH 7．6

　　1．05kg/cm² 　，121．3℃灭菌20分钟。

　　九、合成培养基 (实验36，39)

　　(NH₄ 　)₂ 　PO₄ 　 1g

　　KCl 0．2g

　　MgSO₄ 　·7H₂ 　O 0．2g

　　豆芽汁 10ml

　　琼脂 20g

　　蒸馏水 1000ml

　　pH 7．0

　　加12ml0．04%的溴甲酚紫(pH5．2—6．8，颜色由黄色变紫色，作指示剂)。1．05kg/cm² 　，121．3℃灭菌20分钟。

　　十、豆芽汁蔗糖 (或葡萄糖)培养基 (实验37，38)

　　黄豆芽 100g

　　蔗糖(或葡萄糖) 50g

　　水 1000ml

　　pH 自然

　　称新鲜豆芽100g，放入烧杯中，加水1000ml，煮沸约半小时，用纱布过滤。用水补足原量，再加入蔗糖(或葡萄糖)50g，煮沸溶化。1．05kg/cm² 　，121．3℃灭菌20分钟。

　　十一、油脂培养基 (实验40)

　　蛋白胨 10g

　　牛肉膏 5g

　　NaCl 5g

　　香油或花生油 10g

　　1．6%中性红水溶液 1ml

　　琼脂 15—20g

　　蒸馏水 1000ml

　　pH 7．2

　　1．05kg/cm² 　，121．3℃灭菌20分钟。

　　注：1．不能使用变质油。

　　2．油和琼脂及水先加热。

　　3．调好pH后，再加入中性红。

　　4．分装时，需不断搅拌，使油均匀分布于培养基中。

　　十二、淀粉培养基 (实验40，45)

　　蛋白胨 10g

　　NaCl 5克

　　牛肉膏 5克

　　可溶性淀粉 2g

　　蒸馏水 1000ml

　　琼脂 15—20g

　　1．05kg/cm² 　，121．3℃灭菌20分钟。

　　十三、明胶培养基 (实验40)

　　牛肉膏蛋白胨液 100ml

　　明胶 12—18g

　　pH 7．2—7．4

　　在水浴锅中将上述成分溶化，不断搅拌。溶化后调pH7．2—7．4。

　　0．56kg/cm² 　(8磅/英寸² 　)，112．6℃灭菌30分钟。

　　十四、蛋白胨水培养基 (实验42)

　　蛋白胨 10g

　　NaCl 5克

　　水 1000ml

　　pH 7．6

　　1．05kg/cm² 　，121．3℃灭菌20分钟。

　　十五、糖发酵培养基 (实验41)

　　蛋白胨水培养基 1000ml

　　酸性复红水溶液① 2—5ml

　　pH 7．6

　　另配20%糖溶液(葡萄糖、乳糖、蔗糖等)各10ml。

　　制法：

　　1．将上述含指示剂的蛋白胨水培养基(pH7．6)分装于试管中，在每管内放一倒置的小玻璃管，使充满培养液。

　　2．将已分装好的蛋白胨水和20%的各种糖溶液分别灭菌，蛋白胨水1．05kg/cm² 　，121．3℃灭菌20分钟；糖溶液0．56kg/cm² 　(8磅/英寸² 　)，112．6℃灭菌30分钟。

　　3．灭菌后，每管以无菌操作分别加入20%的无菌糖溶液0．5ml(按每10ml培养基中加入20%的糖液0．5ml，则成1%的浓度)。

　　配制用的试管必须洗干净，避免结果混乱。

　　①0．5%酸性复红水溶液100ml加1mol/LNaOH16ml即成。

　　十六、葡萄糖蛋白胨水培养基 (实验42)

　　蛋白胨 5g

　　葡萄糖 5g

　　K₂ 　HPO₄ 　 2g

　　蒸馏水 1000ml

　　将上述各成分溶于1000ml水中，调pH7．0—7．2，过滤。分装试管，每管10ml，0．56kg/cm₂ 　(8磅/英寸² 　)，112．6℃灭菌30分钟。

　　十七、 H₂ 　S试验用培养基 (实验42)

　　蛋白胨 20g

　　NaCl 5g

　　柠檬酸铁铵 0．5g

　　Na₂ 　S₂ 　O₃ 　 0．5g

　　琼脂 15—20g

　　蒸馏水 1000ml

　　pH 7．2

　　先将琼脂、蛋白胨溶化，冷至60℃加入其他成分。分装试管，0．56kg/cm² 　(8磅/英寸² 　)，112．6℃灭菌15分钟，备用。

　　十八、柠檬酸盐培养基 (实验42)

　　NH₄ 　H₂ 　PO₄ 　 1g

　　K₂ 　HPO₄ 　 1g

　　NaCl 5g

　　MgSO₄ 　 0．2g

　　柠檬酸钠 2g

　　琼脂 15—20g

　　蒸馏水 1000ml

　　1%溴麝香草酚蓝酒精液 10ml

　　将上述各成分加热溶解后，调pH6．8，然后加入指示剂，摇匀，用脱脂棉过滤。制成后为黄绿色，分装试管，1．05kg/cm² 　，121．3℃灭菌20分钟后制成斜面。

　　十九、土霉素效价测定用培养基 (实验44)

　　培养基Ⅰ(供培养试验菌用)

　　蛋白胨 5g

　　酵母膏 3g

　　牛肉膏 1．5g

　　NaCl 3．5g

　　葡萄糖 1g

　　K₂ 　HPO₄ 　 3．68g

　　KH₂ 　PO₄ 　 1．32g

　　琼脂 20—25g

　　蒸馏水 1000ml

　　pH 7．2

　　1．05kg/cm² 　，121．3℃灭菌20分钟。

　　培养基Ⅱ(供摊布双碟的上，下层用)

　　蛋白胨 6g

　　酵母膏 6g

　　牛肉膏 1．5g

　　葡萄糖 1g

　　琼脂 15—18g

　　蒸馏水 1000ml

　　pH 6．8

　　1．05kg/cm² 　，121．3℃灭菌20分钟。

　　二十、酪蛋白培养基 (实验46)

　　KH₂ 　PO₄ 　 0．36g

　　Na₂ 　HPO₄ 　·12H₂ 　O 1．3g

　　NaCl 0．1g

　　ZnSO₄ 　·7H₂ 　O 0．02g

　　CaCl₂ 　·2H₂ 　O 0．002g

　　酪素 4g

　　酪素水解氨基酸 0．05g

　　琼脂 15—20g

　　蒸馏水 1000ml

　　pH 7．0—7．2

　　先称取4g酪素，再加入0．5mol/LNaOH约2ml，将酪素溶解；然后依次加入其他药品，最后调pH7．0—7．2。0．56kg/cm² 　(8磅/英寸² 　)，112．6℃灭菌30分钟。

　　二十一、完全培养基 (TYEG培养基) (实验47)

　　胰蛋白胨 10g

　　酵母浸膏 5g

　　K₂ 　HPO₄ 　 3g

　　葡萄糖 1g

　　琼脂 15—20g

　　蒸馏水 1000ml

　　pH 7．0

　　1．05kg/cm² 　，121．3℃灭菌20分钟。

　　二十二、基本培养基 (MM培养基) (实验47)

　　(NH₄ 　)₂ 　SO₄ 　 1g

　　K₂ 　HPO₄ 　 7g

　　KH₂ 　PO₄ 　 3g

　　柠檬酸钠 0．5g

　　MgSO₄ 　·7H₂ 　O 0．1g

　　葡萄糖 5g

　　琼脂 15—20g

　　蒸馏水 1000ml

　　1．05kg/cm² 　，121．3℃灭菌20分钟。

　　二十三、复红亚硫酸钠培养基 (远藤氏培养基) (实验60，61)

　　蛋白胨 10g

　　乳糖 10g

　　K₂ 　HPO₄ 　 3．5g

　　琼脂 20—30g

　　蒸馏水 1000ml

　　无水亚硫酸钠 5g左右

　　5%碱性复红乙醇溶液 20ml

　　先将琼脂加入900ml蒸馏水中，加热溶解，再加入磷酸氢二钾及蛋白胨，使溶解，补足蒸馏水至1000ml，调pH至7．2—7．4。加入乳糖，混匀溶解后，0．70kg/cm² 　(10磅/英寸² 　)，115．2℃灭菌20分钟。称取亚硫酸钠置一无菌空试管中，加入无菌水少许使溶解，再在水浴中煮沸10分钟后，立刻滴加于20ml5%碱性复红乙醇溶液中，直至深红色褪成淡粉红色为止。将此亚硫酸钠与碱性复红的混合液全部加至上述已灭菌的并仍保持溶化状态的培养基中，充分混匀，倒平皿，放冰箱备用。贮存时间不宜超过2周。

　　二十四、伊红美蓝培养基 (EMB培养基) (实验60，61)

　　蛋白胨水琼脂培养基 100ml

　　20%乳糖溶液 2ml

　　2%伊红水溶液 2ml

　　0．5%美蓝水溶液 1ml

　　将已灭菌的蛋白胨水琼脂培养基(pH7．6)加热溶化，冷却至60℃左右时，再把已灭菌的乳糖溶液、伊红水溶液及美蓝水溶液按上述量以无菌操作加入。摇匀后，立即倒平板。乳糖在高温灭菌易被破坏必须严格控制灭菌温度，一般是0．70kg/cm² 　(10磅/英寸² 　)，115．2℃灭菌20分钟。

　　二十五、乳糖蛋白胨培养液 (“水的细菌学检查”用) (实验60、61)

　　蛋白胨 10g

　　牛肉膏 3g

　　乳糖 5g

　　NaCl 5g

　　1．6%溴甲酚紫乙醇溶液 1ml

　　蒸馏水 1000ml

　　将蛋白胨、牛肉膏、乳糖及Nacl加热溶解于1000ml蒸馏水中，调pH至7．2—7．4。加入1．6%溴甲酚紫乙醇溶液1ml，充分混匀，分装于有小倒管的试管中。0．70kg/cm² 　(10磅/英寸² 　)，115．2℃灭菌20分钟。