凝胶层析法
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1 ．凝胶的选择 根据层析物质分子量的大小选择不同型号的凝胶，如除盐和除游离的荧光素，则可选用粗、中粒度的 G28 或 G500 ， G250 多用于分离蛋白质单体， G200 多用于分离蛋白质凝胶聚合体等。
2 ．凝胶的预处理 称取适量的凝胶加入过量的缓冲液在冰箱（或室温）中充分膨胀，或在沸水中煮，膨胀时间应根据不同型号的凝胶而定。为使粒子均匀一致需进行浮选，即加入凝胶粒子后，轻轻搅拌，静置 20min ，倾去沉淀的粒子，如此反复数次即可。
3 ．装柱 层析柱的选择一般根据分离样品的种类和样品的数量而定。纯化蛋白质时，柱床体积应为样品体积的 25 ～ 100 倍。去盐、游离荧光素约为样品体积的 4 ～ 10 倍。柱太短，影响分离效果。柱长一些，分离效果好，但柱太长，则延长分离时间，样品也稀释过度。层析柱的内径也要选择适当。内径过细，会发生“器壁效应”，即靠近管壁的流速要大于中心的流速影响分离效果。所以层析柱的内径和高度应有一定的比例。对于除盐来说应为 1 ︰ 5 ～ 1 ︰ 25 ；对于纯化蛋白质来说应为 1 ︰ 20 ～ 1 ︰ 100 。
装柱过程基本同离子交换层析柱。
4 ．加样与洗脱 样品体积不宜过多，最好为床体积的 1 ％～ 5% ，最多不要超过 10% 。样品浓度也不宜过大，浓度过大粘度大，分离效果差，一般不超过 4% 。
洗脱液应与膨胀一致，否则更换溶剂，凝胶体积会发生变化，影响分离效果。洗脱液要有一定的离子强度和 pH 值。分离血清蛋白常用 0.02 ～ 0.1Mol/L pH 6.9~8.0 的 PBS 液（ 0.14Mol/L NaCl ）和 0.1Mol/L pH8.0Tris-HCl 缓冲盐溶液（ 0.14Mol/L NaCl ）。
5 ．洗脱液收集 同离子交换层析。
6 ．凝胶柱的重复使用与保存 当样品的各组分全部洗脱下来之后，即可加入新的样品，继续使用。保存方法有三种：
⑴ 在液相中保存最方便，即于凝胶悬液中加入防腐剂（一般为 0.02%N2 N3 或 0.002% 洗必泰）或高压灭菌后 4 ℃保存。此法至少可以保存半年以上。
⑵ 用完后，以水冲洗，然后用 60%~70% 酒精液冲洗，凝胶体积缩小，即在半收缩状态下保存。
⑶ 长期不用者，最好以干燥状态保存，即水洗净后，用含乙醇的水洗，逐渐加大乙醇用量，最后用 95% 的乙醇洗，可全部去水，再用乙烯去除乙醇，抽滤干，于 60 ℃ ~ 80 ℃干燥后保存。
