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红细胞脆性的测定

互联网2013-11-13

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实验原理

正常红细悬浮于等渗的血浆中，若置于高渗溶液内，则红细胞会因失水而皱缩；反之，置于低渗溶液内，则水进入红细胞，使红细胞膨胀。如环境渗透压继续下降，红细胞会因继续膨胀而破裂，释放血红蛋白，称之为溶血。红细胞膜对低渗溶液具有一定的抵抗力，这一特征称为红细胞的渗透脆性。红细胞膜对低渗溶液的抵抗力越大，红细胞在低渗溶液中越不容易发生溶血，即红细胞渗透脆性越小。将血液滴入不同的低渗溶液中，可检查红细胞膜对于低渗溶液抵抗力的大小。开始出现溶血现象的低渗溶液浓度，为该血液红细胞的最小抵抗力；出现完全溶血时的低渗溶液浓度，则为该血液红细胞的最大抵抗力。

　　生理学上将与血浆渗透压相等的溶液称为等渗溶液；而将能维持红细胞正常形态、大小和悬浮于其中的溶液称为等张溶液。等渗溶液不一定是等张溶液（如1.99%的尿素溶液），但等张溶液一定是等渗溶液。

实验试剂

1%肝素，1%氯化钠溶液，蒸馏水。

实验设备

10 ml小试管，试管架，滴管，1 ml移液管。

实验材料

实验步骤

1.溶液配制：取10个小试管，配制出10种不同浓度的氯化钠低渗溶液（0.25%，0.3%，0.35%，0.4%，0.45%，0.5%，0.55%，0.6%，0.65%，0.9%）。

详见下表：

编号	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10
1％NaCl	1.4	1.3	1.2	1.1	1.0	0.9	0.8	0.7	0.6	0.5
蒸馏水	0.6	0.7	0.8	0.9	1.0	1.1	1.2	1.3	1.4	1.5
NaCl ％	0.7	0.65	0.6	0.55	0.50	0.45	0.40	0.35	0.30	0.25

2.制备抗凝血不同动物采血方法各有所异,但多采用末梢血.将血滴在有1%肝素的表面皿上,混匀(1%肝素0.1 ml可抗10 ml血)。

3.加抗凝血：用滴管吸取抗凝血，在各试管中各加一滴，轻轻摇匀，静置1～2 h。

4.观察结果：根据各管中液体颜色和浑浊度的不同，判断红细胞脆性。

①未发生溶血的试管：液体下层为大量红细胞沉淀，上层为无色透明，表明无红细胞破裂。

②部分红细胞溶血的试管：液体下层为红细胞沉淀，上层出现透明淡红（淡红棕）色，表明部分红细胞已经破裂，称为不完全溶血。

③红细胞全部溶血的试管：液体完全变成透明红色，管底无红细胞沉淀，表明红细胞完全破裂，称为完全溶血。

注意事项

1. 混匀时，轻轻倾倒1～2次，减少机械震动，避免人为溶血。

2. 抗凝剂最好为肝素，其他抗凝剂可改变溶液的渗透性。

3. 配制不同浓度的NaCl溶液时应力求准确、无误。NaCl溶液的浓度梯度可根据动物的实际情况适当进行调整。

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