大鼠白细胞三烯B4(LTB4)ELISA试剂盒 说明书

 

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大鼠白细胞三烯 B4(LTB4)ELISA 试剂盒

  ( 用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内 )

 

原理

本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA 法。用抗大鼠 LTB4 单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的 LTB4 与单抗结合，加入生物素化的抗大鼠 LTB4 ，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的 Streptavidin 与生物素结合，加入底物工作液显蓝色，最后加终止液硫酸，在 450nm 处测 OD 值， LTB4 浓度与 OD 值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中 LTB4 浓度。

试剂盒组成 （ 2-8℃ 保存）

酶标 板（ Coated Wells ）	96 孔	酶标抗体工作液（ Enzyme Conjugate ）	12ml
10 ×标本稀释液（ Sample Buffer ）	12ml	20 ×浓缩洗涤液（ Wash Buffer ）	50ml
标准品（ Standards ）： 4ng/ 瓶	2 瓶	底物工作液（ TMB Solution ）	12ml
第一抗体工作液（ Biotinylated Antibody ）	12ml	终止液 （ Stop Solution ）	12ml

准备试剂与收集血样

1.          收集标本：血清、血浆（ EDTA 、柠檬酸盐、肝素抗凝）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测， 2-8℃ 保存 48 小时；更长时间须冷冻（ -20 ℃ 或 -70 ℃ ）保存，避免反复冻融。

2.          标准品液配制：使用前加入 1ml 蒸馏水 混匀，配成 4000pg/ml 的溶液 。 设标准管 8 管，每管加入标本稀释液 300ul 。在第一管中加入 4000pg/ml 的标准品溶液 300ul 混匀后用加样器吸出 300ul ，移至第二管。如此反复作对倍稀释，从第七管中吸出 300ul 弃去。第八管为空白对照。

3.          10 ×标本稀释液用蒸馏水作 1:10 倍稀释（ 示例： 1ml 浓稀释液 +9ml 蒸馏水）。

4.         洗涤液：用重蒸水 1:20 稀释（示例： 1ml 浓缩洗涤液加入 19ml 的重蒸水）

检测程序

1.          加样：每孔各加入标准品或待测样品 100ul ，将反应板充分混匀后置 37 ℃ 120 分钟。

2.          洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤 4-6 次，向滤纸上印干。

3.          每孔中加入第一抗体工作液 100ul 。将反应板充分混匀后置 37 ℃ 60 分钟。

4.          洗板：同前。

5.          每孔加酶标抗体工作液 100ul 。将反应板置 37 ℃ 30 分钟。

6.          洗板：同前。

7.          每孔加入底物工作液 100ul ，置 37 ℃ 暗处反应 15 分钟。

8.          每孔加入 100ul 终止液混匀。

9.          30 分钟内用酶标仪在 45 0nm 处测 吸光值。

结果计算与判断

1.          所有 OD 值都应减除空白值后再行计算。

2.          以标准品 2000 、 1000 、 500 、 250 、 125 、 62.5 、 31.2 、 0 pg/ml 为横坐标， OD 值为纵坐标，在坐标纸上作图，画出标准曲线。

3.          根据样品 OD 值在该曲线图上查出相应 LTB4 含量。

试剂盒性能

              1.   灵敏度 ： 最小的 LTB4 检测浓度小于 15pg/ml 。

2.        特异性： 可同时检测重组或天然的大鼠 LTB4 。 不与 大鼠其它细胞因子有交叉反应。

3.        重复性：板内、板见变异系数均小于9.6 ％。

注意事项

              1.   以上标准孔及待测样品均建议做复孔，每次测定应同时做标准曲线。

  2.   洗涤过程 很关键。洗涤不充分将导致精确度误差及 OD 值错误地升高。

              3.   板条开封后剩余板条要再封好，保持板条干燥 。

              4.   本试剂盒宜置 4^o C 冰箱保存。

  5.   本试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断！