丁香实验_LOGO
登录
提问
提问
我要登录
|免费注册
丁香通
点赞
收藏
wx-share
分享

小鼠肝炎病毒抗体(MHV-Ab)酶联免疫分析(ELISA)

互联网

721

小鼠肝炎病毒抗体( MHV -Ab<font>)</font> 酶联免疫 分析( ELISA

试剂 盒使用说明书

本试剂仅供研究使用 目的:本试剂盒用于检测小鼠血清,血浆及相关液体样本中肝炎病毒抗体( MHV -Ab)水平,感染人的血液学诊断。

实验原理

本试剂盒 用双 抗原 夹心 酶联免疫 (<font>ELISA</font> <font>)</font> 测定 标本 小鼠肝炎病毒抗体( MHV -Ab<font>)</font> 。用纯化的 抗原 包被微孔板,制成固相 抗原 可与样品中肝炎病毒抗体( MHV -Ab<font>)</font> 相结合 经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后 再与<font>HRP</font> <font>标记的抗原结合,形成抗原</font> <font>-</font> <font>抗体</font> <font>-</font> <font>酶标抗原复合物</font> ,经过彻底洗涤后 底物<font>TMB</font> <font>显色。</font> <font>TMB</font> <font>在</font> HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在 450 nm<font>波长下测定吸光度(</font> <font>OD</font> <font>值)</font> ,与<font>CUTOFF</font> <font>值相比较,从而判定标本中小鼠肝炎病毒抗体(</font> MHV -Ab<font>)</font> 的存在与否。

试剂盒组成

试剂盒组成

48<font>孔配置</font>

96<font>孔配置</font>

保存

说明书

1<font>份</font>

1<font>份</font>

封板膜

2<font>片(</font> <font>48</font> <font>)</font>

2<font>片(</font> <font>96</font> <font>)</font>

密封袋

1<font>个</font>

1<font>个</font>

酶标包被板

1 ×<font>48</font>

1 ×<font>96</font>

2-8<font>℃保存</font>

阴性对照

0.5ml<font>×</font> <font>1</font> <font>瓶</font>

0.5ml<font>×</font> <font>1</font> <font>瓶</font>

2-8<font>℃保存</font>

阳性对照

0.5ml<font>×</font> <font>1</font> <font>瓶</font>

0.5ml<font>×</font> <font>1</font> <font>瓶</font>

2-8<font>℃保存</font>

酶标试剂

3 ml<font>×</font> <font>1</font> <font>瓶</font>

6 ml<font>×</font> <font>1</font> <font>瓶</font>

2-8<font>℃保存</font>

样品稀释液

3 ml<font>×</font> <font>1</font> <font>瓶</font>

6 ml<font>×</font> <font>1</font> <font>瓶</font>

2-8<font>℃保存</font>

显色剂<font>A</font> <font>液</font>

3 ml<font>×</font> <font>1</font> <font>瓶</font>

6 ml<font>×</font> <font>1</font> <font>瓶</font>

2-8<font>℃保存</font>

显色剂<font>B</font> <font>液</font>

3 ml<font>×</font> <font>1</font> <font>瓶</font>

6 ml<font>×</font> <font>1</font> <font>瓶</font>

2-8<font>℃保存</font>

终止液

3ml<font>×</font> <font>1</font> <font>瓶</font>

6ml<font>×</font> <font>1</font> <font>瓶</font>

2-8<font>℃保存</font>

浓缩洗涤液

(<font>20ml</font> <font>×</font> <font>20</font> <font>倍)×</font> <font>1</font> <font>瓶</font>

(<font>20ml</font> <font>×</font> <font>30</font> <font>倍)×</font> <font>1</font> <font>瓶</font>

2-8<font>℃保存</font>

样本处理及要求

1. <font>血清:室温血液自然凝固</font> <font>10-20</font> <font>分钟,离心</font> <font>20</font> <font>分钟左右(</font> <font>2000-3000</font> <font>转</font> <font>/</font> <font>分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。</font>

2. <font>血浆:应根据标本的要求选择</font> <font>EDTA</font> <font>或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合</font> <font>10-20</font> <font>分钟后,离心</font> <font>20</font> <font>分钟左右(</font> <font>2000-3000</font> <font>转</font> <font>/</font> <font>分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。</font>

3. <font>尿液:用无菌管收集,离心</font> <font>20</font> <font>分钟左右(</font> <font>2000-3000</font> <font>转</font> <font>/</font> <font>分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。</font>

4. <font>细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心</font> <font>20</font> <font>分钟左右(</font> <font>2000-3000</font> <font>转</font> <font>/</font> <font>分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用</font> <font>PBS</font> <font>(</font> <font>PH7.2-7.4</font> <font>)稀释细胞悬液,细胞浓度达到</font> <font>100</font> <font>万</font> <font>/ml</font> <font>左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心</font> <font>20</font> <font>分钟左右(</font> <font>2000-3000</font> <font>转</font> <font>/</font> <font>分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。</font>

5. <font>组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的</font> <font>PBS</font> <font>,</font> <font>PH7.4</font> <font>。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持</font> <font>2-8</font> <font>℃的温度。加入一定量的</font> <font>PBS</font> <font>(</font> <font>PH7.4</font> <font>),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心</font> <font>20</font> <font>分钟左右(</font> <font>2000-3000</font> <font>转</font> <font>/</font> <font>分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。</font>

6. <font>标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可</font> 将标本放于 -20 ℃保存,但 避免反复冻融 .

7. 不能检测含NaN3的样品 ,因<font>NaN3</font> <font>抑制辣根过氧化物酶的(</font> <font>HRP</font> <font>)活性。</font>

操作步骤

1. 编号:将样品对应微孔按序编号,每板应设阴性对照<font>2</font> 孔、 阳性对照<font>2</font> <font>孔、空白对照</font> <font>1</font> <font>孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)</font>

2. 加样:分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照<font>50</font> μl 。然后在 待测样品孔 先加样品稀释液<font>40</font> μl ,然后再加待测样品<font>10</font> μl 加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁, 轻轻 晃动 混匀,

3. 温育:用封板膜封板后置<font>37</font> ℃温育3 0 分钟

4. 配液:将<font>30</font> <font>(</font> <font>48T</font> <font>的</font> <font>20</font> <font>倍)倍浓缩洗涤液加蒸馏水至</font> <font>600ml</font> <font>后备用</font>

5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体, 甩干 ,每孔加满洗涤液,静置<font>30</font> <font>秒后弃去,如此重复</font> <font>5</font> <font>次,拍干。</font>

6. 加酶:每孔加入酶标试剂<font>50</font> μl ,空白孔除外

7. 温育:操作同<font>3</font> <font>。</font>

8. 洗涤:操作同<font>5</font> <font>。</font>

9. 显色:每孔先加入显色剂<font>A 50</font> μl ,再加入显色剂<font>B 50</font> μl ,轻轻震荡混匀,<font>37</font> ℃避光显色15分钟

10. 终止:每孔加终止 液<font>50μl</font> <font>,终止反应</font> (此时蓝色立转黄色)

11. 测定:以空白空调零, 4 50 nm<font>波长依序测量各孔的</font> 吸光 度(<font>OD</font> <font>值)</font> 测定应在加终止液后<font>15</font> <font>分钟以内进行。</font>

结果判定:

试验有效性:阳性对照孔平均值 1.00; <font>阴性对照平均值</font> 0.10

临界值(<font>CUT OFF</font> <font>)计算:临界值</font> = 阴性对照孔平均值<font>+0.15</font>

阴性判定:样品<font>OD</font> <font>值</font> < 临界值(<font>CUT OFF</font> <font>)者为</font> 肝炎病毒抗体( MHV -Ab<font>)</font> 阴性

阳性判定:样品<font>OD</font> <font>值</font> 临界值(<font>CUT OFF</font> <font>)者为</font> 肝炎病毒抗体( MHV -Ab<font>)</font> 阳性

注意事项

1<font>.操作严格按照说明书进行,本试剂不同批号组分不得混用。</font>

2<font>.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡</font> <font>15-30</font> <font>分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。</font>

3<font>.</font> 浓洗涤液 可能 会有 结晶 析出,稀释时可在水浴中加温助溶 ,洗涤时不影响结果。

4. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

5<font>.底物请避光保存。</font>

6<font>.试验结果判定必须以酶标仪读数为准,使用双波长检测时,参考波长为</font> <font>630nm</font>

7<font>.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为</font> <font>2M</font> <font>的硫酸,使用时必须注意安全。</font>

保存条件及有效期

1<font>.</font> 试剂盒保存: ;<font>2-8</font>

2<font>.有效期:</font> <font>6</font> <font>个月</font>

-------------------------------------------------------------------------------------------

Shanghai Yueyan Biological Technology Co.,Ltd

Address:Room1104,No.9Building,Ning Guo Road No313,YangPu District,Shanghai,China.

Tel:+86-021-55785280 55785281

Fax:+86-021-55785279

E-mail:biolzy@yahoo.cn

-------------------------------------------------------------------------------------------

提问
扫一扫
丁香实验小程序二维码
实验小助手
丁香实验公众号二维码
关注公众号
反馈
TOP
打开小程序