疟原虫培养方法

疟疾不完全培养基(Uncomplete Malaria-Culture Medium，UMCM)成分包括RPMI1640 10.43 g/L，Hepes 5.92g/L，NaHCO3 3g/L，调至pH 7.3-7.4，不加血清，过滤除菌，�20℃保存。临用前加AB+血清至终浓度为10%即配成疟疾完全培养基 (Complete Malaria-Culture Medium，MCM)，4℃保存，限用两周。人O+ 红细胞(Red Blood Cell，RBC)由本实验室志愿者提供，人AB+血清来自xx医院输血科，使用前56℃灭活60 min。

红内期疟原虫体外连续培养
50% RBC悬液的制备：从储存RBC中取出适量RBC至干净无菌离心管中，加入5mLUMCM，轻缓吹打悬浮，1500 rpm离心5min，先吸除RBC表层白细胞，然后弃去上清。如此洗涤两次后弃去上清，加入与细胞压积等体积的MCM，轻缓混匀。储于4℃备用，两周内使用有效。
疟原虫体外培养按照本教研室的培养方法进行。常规每天MCM换液一次，每逢裂殖体期添加一次50% RBC悬液。

疟原虫同步化处理
疟原虫同步化处理按照本教研室方法进行。选择原虫密度较高且环状体较丰富的生活阶段，将培养原虫吸至刻度离心管中，2000 rpm离心5 min，吸弃上清，于细胞压积中加入5倍体积37℃预热的5% D-山梨醇(即0.274 mol/L)，充分混匀，于37℃作用5-10min，2000 rpm离心5 min后吸弃上清及上层棕色沉淀，加入至少2倍体积MCM，充分混匀，同上离心，弃去上清，加等体积MCM和2-3倍体积50%的RBC悬液，用MCM将培养物稀释为5%的细胞悬液后，完全转入培养瓶，放于CO2孵箱培养。48 h(一个生活史周期)后再进行一次同步化处理