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疟原虫培养方法

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1846

疟疾不完全培养基(Uncomplete Malaria-Culture Medium,UMCM)成分包括RPMI1640 10.43 g/L,Hepes 5.92g/L,NaHCO3 3g/L,调至pH 7.3-7.4,不加血清,过滤除菌,�20℃保存。临用前加AB+血清至终浓度为10%即配成疟疾完全培养基 (Complete Malaria-Culture Medium,MCM),4℃保存,限用两周。人O+ 红细胞(Red Blood Cell,RBC)由本实验室志愿者提供,人AB+血清来自xx医院输血科,使用前56℃灭活60 min。

红内期疟原虫体外连续培养
50% RBC悬液的制备:从储存RBC中取出适量RBC至干净无菌离心管中,加入5mLUMCM,轻缓吹打悬浮,1500 rpm离心5min,先吸除RBC表层白细胞,然后弃去上清。如此洗涤两次后弃去上清,加入与细胞压积等体积的MCM,轻缓混匀。储于4℃备用,两周内使用有效。
疟原虫体外培养按照本教研室的培养方法进行。常规每天MCM换液一次,每逢裂殖体期添加一次50% RBC悬液。

疟原虫同步化处理
疟原虫同步化处理按照本教研室方法进行。选择原虫密度较高且环状体较丰富的生活阶段,将培养原虫吸至刻度离心管中,2000 rpm离心5 min,吸弃上清,于细胞压积中加入5倍体积37℃预热的5% D-山梨醇(即0.274 mol/L),充分混匀,于37℃作用5-10min,2000 rpm离心5 min后吸弃上清及上层棕色沉淀,加入至少2倍体积MCM,充分混匀,同上离心,弃去上清,加等体积MCM和2-3倍体积50%的RBC悬液,用MCM将培养物稀释为5%的细胞悬液后,完全转入培养瓶,放于CO2孵箱培养。48 h(一个生活史周期)后再进行一次同步化处理

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