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细菌的人工培养

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人工制备营养充足的培养基并提供适宜的温度、气体、pH等培养条件,即能使细菌 在体外环境迅速生长繁殖。细菌培养对临床上病原菌的分离鉴定、制备抗生素、制备疫苗等生物制品都是必不可少的。
一、培养基的制备原则:
1、必须有充足的营养。
2、合适的酸碱度。
3、绝对无菌。
二、培养基的制备
培养基是用人工方法将多种营养物质按照各类微生物 生长的需要而合成的一种混合营养料。
常用的培养基有基础培养基、营养培养基、选择培养基、鉴别培养基、厌氧培养基等。
按照培养基的物理性状可分为液体,固体和半固体三类。
以下介绍常用基础培养基的制备。
(一)肉汤培养基:
制法:称取营养肉汤粉1.8g(含牛肉膏0.3克g,蛋白胨1g、氯化钠0.5g)加入100ml蒸馏水中,用玻棒搅拌加热溶解。按需要分装于三角瓶或试管,瓶口或管口塞棉塞,包装后置高压蒸汽灭菌器内,在0.11Mpa(1.05公斤/厘米2)压力下,温度达1210C,维持15~20分钟。冷却后贴好标签,40C冰箱贮存备用。
制成后的肉汤呈浅黄色,清晰透明,pH 7.1+0.2
肉汤培养基常用于增菌培养。
(二)肉汤琼脂 固体培养基:
在上述肉汤培养基中加入2~3%琼脂即成。经高压灭菌后,趁热将试管斜置、冷凝,即成普通琼脂斜面培养基;或趁热取出后,稍冷,以无菌操作倾入灭菌的空培养皿,冷凝后即为普通琼脂平板。制作琼脂平板时,每一空皿(9厘米直径)需培养基15~20ml。
普通琼脂平板用于分离培养繁殖细菌;普通琼脂斜面用于纯培养和保存菌种。(琼脂是从石花菜等海藻类中提取的多糖物质,当温度达到98℃以上可溶化,45℃以下则凝固。琼脂对细菌一般无营养作用,用做斜面、平板、高层等不同类型固体培养基的凝固剂。琼脂通常呈酸性,加入液体培养基中可使酸碱度下降pH 0.2左右。)
(三)肉汤琼脂半固体培养基:
在上述肉汤培养基中加入0.3~0.5%琼脂,加热溶化后,分装于小试管(10×100mm),每管约3ml,高压灭菌后直立冷凝即成。
半固体培养基用于检查细菌的动力和细菌菌种的保存。
三、常用培养基介绍
(一)基础培养基
基础培养基含有大多数细菌生长繁殖时所需要的氮源、碳源、无机盐类、水份等最基本的营养成份,可供大多数细菌生长,并可作为营养、鉴别及选择培养基的基础原料。常用的如肉汤培养基。
(二)营养培养基
在基础培养基中添加一些其他的营养物质,如葡萄糖、血液、血清、酵母浸膏、生长因子等,可供培养营养要求较高的细菌。例如血琼脂平板、血清肉汤培养基等。
(三)鉴别培养基
利用各种细菌分解糖类和蛋白质的能力及其代谢产物的不同,在培养基中加入特定的作用底物,观察细菌在其中生长后分解底物的作用,从而鉴别和鉴定细菌。例如,单糖发酵管就是在无糖的基础培养基(蛋白胨水)中加入某种糖类及指示剂,因不同细菌对各种糖类发酵作用不同而鉴别之。
(四)选择培养基
在培养基中加入某种化学物质,使之抑制某一类细菌生长,而有利于另一类细菌生长,从而将后者筛选出来,常用在含有杂菌的标本中分离某种致病菌,例如SS琼脂平板。
(五)厌氧培养基(见实验十-厌氧性细菌,P.80)
四、细菌的接种技术和培养方法:
一般细菌都可用人工方法进行培养,以进一步研究它们的各种生物学特性。培养细菌时,根据研究目的和细菌生长条件的差异,需采用不同的接种技术和培养方法。
(一)细菌的接种技术
接种技术一般分为分离培养接种法和纯种细菌接种法,正确的接种技术是获得典型的生长良好的细菌培养物所必需的。

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