细菌的人工培养

人工制备营养充足的培养基并提供适宜的温度、气体、pH等培养条件，即能使细菌在体外环境迅速生长繁殖。细菌培养对临床上病原菌的分离鉴定、制备抗生素、制备疫苗等 生物 制品都是必不可少的。
一、培养基的制备原则：
1、必须有充足的营养。
2、合适的酸碱度。
3、绝对无菌。
二、培养基的制备
培养基是用人工方法将多种营养物质按照各类微 生物 生长的需要而合成的一种混合营养料。
常用的培养基有基础培养基、营养培养基、选择培养基、鉴别培养基、厌氧培养基等。
按照培养基的物理性状可分为液体，固体和半固体三类。
以下介绍常用基础培养基的制备。
（一）肉汤培养基：
制法：称取营养肉汤粉1.8g（含牛肉膏0.3克g，蛋白胨1g、氯化钠0.5g）加入100ml蒸馏水中，用玻棒搅拌加热溶解。按需要分装于三角瓶或 试管 ，瓶口或管口塞棉塞，包装后置高压蒸汽灭菌器内，在0.11Mpa（1.05公斤/厘米2）压力下，温度达1210C，维持15～20分钟。冷却后贴好标签，40C冰箱贮存备用。
制成后的肉汤呈浅黄色，清晰透明，pH 7.1+0.2
肉汤培养基常用于增菌培养。
（二）肉汤琼脂固体培养基：
在上述肉汤培养基中加入2～3%琼脂即成。经高压灭菌后，趁热将 试管 斜置、冷凝，即成普通琼脂斜面培养基；或趁热取出后，稍冷，以无菌操作倾入灭菌的空培养皿，冷凝后即为普通琼脂平板。制作琼脂平板时，每一空皿（9厘米直径）需培养基15～20ml。
普通琼脂平板用于分离培养繁殖细菌；普通琼脂斜面用于纯培养和保存菌种。（琼脂是从石花菜等海藻类中提取的多糖物质，当温度达到98℃以上可溶化，45℃以下则凝固。琼脂对细菌一般无营养作用，用做斜面、平板、高层等不同类型固体培养基的凝固剂。琼脂通常呈酸性，加入液体培养基中可使酸碱度下降pH 0.2左右。）
（三）肉汤琼脂半固体培养基：
在上述肉汤培养基中加入0.3～0.5％琼脂，加热溶化后，分装于小试管（10×100mm），每管约3ml，高压灭菌后直立冷凝即成。
半固体培养基用于检查细菌的动力和细菌菌种的保存。
三、常用培养基介绍
（一）基础培养基
基础培养基含有大多数细菌生长繁殖时所需要的氮源、碳源、无机盐类、水份等最基本的营养成份，可供大多数细菌生长，并可作为营养、鉴别及选择培养基的基础原料。常用的如肉汤培养基。
（二）营养培养基
在基础培养基中添加一些其他的营养物质，如葡萄糖、血液、血清、酵母浸膏、生长因子等，可供培养营养要求较高的细菌。例如血琼脂平板、血清肉汤培养基等。
（三）鉴别培养基
利用各种细菌分解糖类和蛋白质的能力及其代谢产物的不同，在培养基中加入特定的作用底物，观察细菌在其中生长后分解底物的作用，从而鉴别和鉴定细菌。例如，单糖发酵管就是在无糖的基础培养基（蛋白胨水）中加入某种糖类及指示剂，因不同细菌对各种糖类发酵作用不同而鉴别之。
（四）选择培养基
在培养基中加入某种化学物质，使之抑制某一类细菌生长，而有利于另一类细菌生长，从而将后者筛选出来，常用在含有杂菌的标本中分离某种致病菌，例如SS琼脂平板。
（五）厌氧培养基（见实验十-厌氧性细菌，P.80）
四、细菌的接种技术和培养方法：
一般细菌都可用人工方法进行培养，以进一步研究它们的各种生物学特性。培养细菌时，根据研究目的和细菌生长条件的差异，需采用不同的接种技术和培养方法。
（一）细菌的接种技术
接种技术一般分为分离培养接种法和纯种细菌接种法，正确的接种技术是获得典型的生长良好的细菌培养物所必需的。