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卵磷脂的提取及鉴定

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一、实验目的
1.加深了解磷脂类物质的结构和性质。
2.掌握卵磷脂的提取鉴定的原理和方法。

二、实验原理
磷脂是生物体组织细胞的重要成分,主要存在于大豆等植物 组织以及动物的肝、脑、脾、心等组织中,尤其在蛋黄中含量较多(10%左右)。卵磷脂和脑磷脂均溶于乙醚而不溶于丙酮,利用此性质可将其与中性脂肪分离开;此外,卵磷脂能溶于乙醇而脑磷脂不溶,利用此性质又可将卵磷脂和脑磷脂分离。
新提取的卵磷脂为白色,当与空气接触后,其所含不饱和脂肪酸会被氧化而使卵磷脂呈黄褐色。卵磷脂被碱水解后可分解为脂肪酸盐、甘油、胆碱和磷酸盐。甘油与硫酸氢钾共热,可生成具有特殊臭味的丙烯醛;磷酸盐在酸性条件下与钼酸铵作用,生成黄色的磷钼酸沉淀;胆碱在碱的进一步作用下生成无色且具有氨和鱼腥气味的三甲胺。这样通过对分解产物的检验可以对卵磷脂进行鉴定。

三、仪器和试剂
仪器
小烧杯、试管。
试剂
1. 鸡蛋黄
2. 红色石蕊试纸
3. 95%乙醇
4. 10%氢氧化钠溶液
5. 钼酸铵试剂将6g 钼酸铵溶于15mL 蒸馏水中,加入5mL 浓氨水,另外将24mL 浓硝酸溶于46mL的蒸馏水中,两者混合静置一天后再用。
6. 丙酮
7. 乙醚
8. 3%溴的四氯化碳溶液

9. 硫酸氢钾
四、操作步骤
(一)卵磷脂的提取
称取约10g 蛋黄于小烧杯中,加入温热的95%乙醇30mL,边加边搅拌均匀,冷却后过滤。如滤液仍然混浊,可重新过滤直至完全透明。将滤液置于蒸发皿内,水浴锅中蒸干,所得干物即为卵磷脂。
(二)卵磷脂的溶解性
取干燥试管,加入少许卵磷脂,再加入5mL 乙醚,用玻棒搅动使卵磷脂溶解,逐滴加入丙酮3~5mL,观察实验现象。
(三)卵磷脂的鉴定
1.三甲胺的检验
取干燥试管一支,加入少量提取的卵磷脂以及2~5mL 氢氧化钠溶液,放入水浴中加热15min,
在管口放一片红色石蕊试纸,观察颜色有无变化,并嗅其气味。将加热过的溶液过滤,滤液供下面检验。
2.不饱和性检验
取干净试管一支,加入10滴上述滤液,再加入1~2滴3% 溴的四氯化碳溶液,振摇试管,观察有何现象产生。
3.磷酸的检验
取干净试管一支,加入10滴上述滤液和5~10滴95%乙醇溶液,然后再加入5~10滴钼酸铵试剂,观察现象;最后将试管放入热水浴中加热5~10min,观察有何变化。
4.甘油的检验
取干净试管一支,加入少许卵磷脂和0.2g 硫酸氢钾,用试管夹夹住并先在小火上略微加热,使卵磷脂和硫酸氢钾混熔,然后再集中加热,待有水蒸气放出时,嗅有何气味产生。
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