杂交瘤细胞的保存方法

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（一）保存 当获得产生所需的单克隆抗体的杂交瘤细胞后，必须将一部分杂交瘤细胞保存，否则在连续传代的过程中，可能产生突变或染色体 的漂移以至丧失固有特性或丢失产生抗体的特性。另外在长期的培养过程中，难免不发生污染以至于毁灭。所以必须冷藏保存一部分。保存方法如下：
1．材料(1) 细胞：取对数生长期的细胞。(2) 10％二甲基亚砜保护液（二甲基亚砜能损坏滤器 ，而又被高压所破坏，所以不能过滤或高压消毒。其本身就是毒品，无菌）：含10％二甲基亚砜、20％灭活胎牛血清，70％RPMI—1640液。(3) 20％FCS—1640培养液：含青霉素100U/ml，链霉素100μg/ml。(4) 灭菌的2ml安瓶等
2．操作方法(1) 去掉细胞培养 瓶中的旧的培养液，加入10％FCS—1640液，使细胞悬浮。(3) 1 000r/min离心10min，去上清。细胞沉淀用10％二甲基亚砜保护液制成悬液，使成1.0×107细胞／ml。(3) 取样，台盼兰染色，计数活细胞，应在95％以上。(4) 用注射器将细胞分装安瓶，每瓶0.5ml～1.0ml，熔封安瓶。(5) 放4℃ 2h。(6) 放液氮罐气态部分（-70℃）15h。(7) 转入液氮部分。
（二）复苏 1．从液氮罐中取出安瓶立即放37℃水浴中速溶。2．无菌操作打开安瓶，取出细胞悬液，转入组织培养瓶。3．逐滴缓慢加入20％FCS－1640培养液3.5ml，这个过程延续3min。4．5％CO2饱和湿度，37℃培养。5．4h后弃去培养液上清，加入新鲜的20％FCS－1640培养液。6．继续培养，换液，以至形成单层。