还原法制备胶体金的五种方法

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胶体金制备方法简单，产用还原法制备胶体金。常采用的还原剂有柠檬酸钠、鞣酸、抗坏血酸、白磷、硼氢化钠等。本文总结了五种制备胶体金颗粒的常用的方法，具体如下：

1、枸橼酸三钠还原法

(1)10nm胶体金粒的制备：取0.01%HAuCl4水溶液100ml，加入1%枸橼酸三钠水溶液3ml，加热煮沸30min，冷却至4℃，溶液呈红色。

(2)15nm胶体金颗粒的制备：取0.01%HAuCl4水溶液100ml，加入1%枸橼酸三钠水溶液2ml，加热煮沸15min～30min，直至颜色变红。冷却后加入0.1Mol/LK2CO30.5ml，混匀即可。

(3)15nm、18nm～20nm、30nm或50nm胶体金颗粒的制备：取0.01%HAuCl4水溶液100ml，加热煮沸。根据需要迅速加入1%枸橼酸三钠水溶液4ml、2.5ml、1ml或0.75ml，继续煮沸约5min，出现橙红色。这样制成的胶体金颗粒则分别为15nm、18～20nm、30nm和50nm.

2、鞣酸-枸橼酸钠还原法

A液：1%HAuCl4水溶液1ml加入79ml双馏水中混匀。

B液：1%枸橼酸三钠4ml，1%鞣酸0.7ml，0.1Mol/LK2CO3液0.2ml，混合，加入双馏水至20ml.

将A液、B液分别加热至60℃，在电磁搅拌下迅速将B液加入A液中，溶液变蓝，继续加热搅拌至溶液变成亮红色。此法制得的金颗粒的直径为5nm.如需要制备其它直径的金颗粒，则按表15-1所列的数字调整鞣酸及K2CO3的用量。

表1鞣酸-枸橼酸钠还原法试剂配制表

金粒直径 （nm）	A液	B液
1％HAuCl4	双馏水	1％枸橼酸三钠	0.1Mol/L K2CO3	1％鞣酸	双馏水
5	1	79	4	0.20	0.70	15.10
10	1	79	4	0.025	0.10	15.875
15	1	79	4	0.0025	0.01	15.9875

3、柠檬酸三钠还原法制备金溶胶

取0、01%氯金酸水溶液100ml加热至沸，搅动下准确加入1%柠檬酸三钠水溶液0.7ml，金黄色的氯金酸水溶液在2分钟内变为紫红色，继续煮沸15分钟，冷却后以蒸馏水恢复到原体积，如此制备的金溶胶其可见光区最高吸收峰在535nm，A1cm/535=1.12。金溶胶的光散射性与溶胶颗粒的大小密切相关，一旦颗粒大小发生变化，光散射也随之发生变异，产生肉眼可见的显著的颜色变化，这就是金溶胶用于免疫 沉淀或称免疫凝集试验的基础。

金溶胶颗粒的直径和制备时加入的柠檬酸三钠量是密切相关的，保持其他条件恒定，仅改变加入的柠檬酸三钠量，可制得不同颜色的金溶胶，也就是不同粒径的金溶胶，见附表。

附表100ml氯金酸中柠檬酸三钠的加入量对金溶胶粒径的影响

1%柠檬酸三钠ml0.300.450.701.001.502.00

金溶胶颜色蓝灰紫灰紫红红橙红橙

吸收峰(nm)220240535525522518

径粒(nm)14797.571.54124.515

4、柠檬酸三钠-鞣酸混合还原剂

用此混合还原剂可以得到比较满意的金溶胶，操作方法如下：取4ml1%柠檬酸三钠(Na3C6H5O7.2H2O)，加入0~5ml1%鞣酸，0~5ml25mmo/LK2CO3(体积与鞣酸加入量相等)，以双蒸馏水补至溶液最终体积为20ml，加热至60℃取1ml1%的HAuCl4，加于79ml双蒸馏水中，水浴加热至60℃，然后迅速将上述柠檬酸-鞣酸溶液加入，于此温度下保持一定时间，待溶液颜色变成深红色(约需0.5~1小时)后，将溶液加热至沸腾，保持沸腾5分钟即可。改变鞣酸的加入量，制得的胶体颗粒大小不同。

5、白磷还原法

在120ml双蒸馏水中加入1.5ml1%氯金酸和1.4ml0.1mol/LK2CO3，然后加入1ml五分之一饱和度的白磷乙醚溶液，混匀后室温放置15分钟，在回流下煮沸直至红褐色转变为红色。此法制得的胶体金直径约6nm，并有很好的均匀度，但白磷和乙醚均易燃易爆，一般实验室不宜采用。

要得到大小更均匀的胶体金颗粒，可采用甘油或蔗糖密度梯度离心，经分级后制得胶体金颗粒直径的变异系数(CV)可小于15%。

制备胶体金所使用的还原剂不同，胶体金颗粒大小会有所不同。免疫胶体金技术以其独特点的优点，在生物医学等领域广泛应用。