细胞表面抗原染色的组织样本制备方法
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该方法适用于新鲜和冷冻标本
1.将组织(10-20mm)切成1-2mm的碎片,用缓冲液或培养液浸湿。
2.用1ml缓冲液或培养液预洗Medicon 二遍。
3.将组织和1ml缓冲液或培养液放入到Medicon中,盖上盖子,将Medicon 插入到Medimachine中。
4.降解组织。降解组织的时间长短依赖于组织类型。(参见降解时间表)。
5.用注射器通过 Medicon上的注射器接口将上清吸去。
6.用1ml缓冲液或培养液冲洗Medicon三遍。
7.选择适当大小孔径的Filcon 滤器 过滤细胞悬液。(50-mmFilcon 适用 于大 多数组织,如:淋巴结、肿瘤组织、皮肤组织)
8.用1ml缓冲液或培养液冲洗Filcon三遍。
9.250g离心细胞悬液5分钟。
10.用适当的缓冲液或培养液重悬细胞沉淀。
11.若需要,重复3-10步骤。
12.调节细胞浓度至5×105-1×106/ml。
13.用适当浓度的抗体在2-80C与100ml细胞悬液孵育15-30分钟。
14.加2ml 冷的缓冲液或培养液(2-80C), 250g离心5分钟。
15.用缓冲液或培养液重悬细胞沉淀。
16.分析样本。
注意:
1.在处理和接触有感染危险性生物样本时,应根据相关法规处理 废液。避免皮肤或粘膜接触样本。勿用嘴移液。
2.该方法虽经验证,但客户需根据自己实验室条件及所处理的组织 类型进行适当调整。
降解时间表:
组织
数量(3-6mm3小块)
脉冲
时间
条件
乳腺组织
3-6
2次
30秒
新鲜或冷冻
膀胱
4-5
2次
20秒
新鲜或冷冻
结肠
3-6
2次
20秒
新鲜或冷冻
胃
4-6
2次
20秒
新鲜或冷冻
胃肿瘤边缘组织
3-6
2次
20秒
新鲜或冷冻
健康组织、胃肿瘤
3-4
2次
20秒
新鲜或冷冻
淋巴结
3-6
2次
15秒
新鲜或冷冻
脾脏
3-6
2次
15秒
新鲜或冷冻
肝脏
3-6
2次
15秒
新鲜或冷冻
卵巢
3-6
2次
30秒
新鲜或冷冻
前列腺
2-3
2次
35秒
新鲜或冷冻
脑组织
3-6
1次
10秒
新鲜或冷冻
肺组织
2-3
2次
30秒
新鲜或冷冻
子宫
3-6
1次
60秒
新鲜或冷冻
皮肤
3-4
1次
45秒
新鲜或冷冻
注意:
该方法虽经验证,但客户需根据自己实验室条件及所处理的组织 类型进行适当调整。