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无毒核酸电泳染料SUPER Green I使用方法

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SUPER Green Ⅰ(10,000× DMSO溶液,电泳级) SUPER Green Ⅰ核酸染料特点

●  无毒性:属花箐类染料,容易生物降解,无致癌毒性。

●  灵敏度高:至少可检出20pg DNA,高于EB染色法25~100倍。

●  信噪比高:样品荧光信号强,背景信号低。

●  操作简单:无须脱色或冲洗,即可直接用紫外凝胶透射仪或可见光透射仪观察。

●  适用范围广:可适用于多种凝胶电泳方法:琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶电泳、脉 

    冲电场凝胶电泳和毛细管电泳等。

●  使用方便:对分子生物学中常用的酶(如:Taq 酶、反转录酶、内切酶、T4连接酶

    等)没有抑制作用。

● 经济:价格比银染便宜。

SUPER Green Ⅰ使用方法简介

1.胶染法(用法同EB)   (推荐方法,见图1)

(1) 制胶时加入SUPER Green I 核酸染料。冷却胶至50℃左右,每100mL胶中加入3~5μL SUPER Green I 核酸染料。

(2) 按照常规方法进行电泳即可。

u  注:此方法染色可以准确确定片段分子量,用量相对较少。1mL染料大约可以做300块100mL的胶。

2.点染法 (见图3)

(1) 该方法适于琼脂糖凝胶电泳和PAGE凝胶电泳。

(2) 工作液的配制:用电泳缓冲液将10000×的SUPER Green Ⅰ稀释100倍,即为SUPER Green Ⅰ工作液。SUPER Green Ⅰ工作液可以置2~8℃保存一个月以上。

(3) 制胶:按常规方法制胶,不含任何染料。

(4) 样品染色:向分析样品中加入SUPER Green Ⅰ工作液和载样缓冲液,室温

放置10分钟,使SUPER Green Ⅰ与样品中DNA充分结合。SUPER Green Ⅰ工作液加入量为总上样量的1/10。

(5) DNA Marker染色:将5μL DNA Marker和5μL DNA Marker稀释液和1μLSUPER Green Ⅰ工作液混匀,室温放置5分钟,使SUPER Green Ⅰ与DNA充分结合。

(6) 上样、电泳:按常规操作。

u  注:用点染法染色时,灵敏度最高,染料用量最少。但大片段稍有滞后现象,如果需要更准确确定分子量(与Marker相比),建议使用胶染法。

3.泡染法

(1) 按照常规方法进行电泳。

(2) 用PH 7.0~8.5 的缓冲液(如:TAE,TBE 或 TE),按照10000�1的比例稀释SUPER GreenⅠ浓缩液,混匀,制成染色溶液。

(3) 将染色溶液倒入合适的聚丙烯容器中,放入凝胶,用铝箔等盖住容器使染料避光。室温振荡染色10~30分钟,染色时间因凝胶浓度和厚度而定。聚丙烯酰胺凝胶直接在玻璃平皿上染色,将配好的工作溶液轻轻地倒在胶板上,让工作液均匀地覆盖整个胶板,并染色30分钟。玻璃平皿必须预先经过硅烷化溶液处理(避免染料吸附在玻璃表面上)。

u  注:用泡染法染色时,可以精确确定核酸片段分子量。但染料用量是三种方法中用量最大的。

4.  点染+胶染法(见图2)

此法结合方法1和方法2,灵敏度最高,对于低浓度样本比EB检测更灵敏。

几种染色方法特点比较

                         特点

染色方法

灵敏度

染料用量

确定片段分子量精确度

胶染法(推荐方法)

较高

较少

较高

点染法

很高

最少

大片段稍有滞后

泡染法

较高

最多

最高

点染+胶染法

最高

较多

大片段稍有滞后

SUPER Green Ⅰ使用注意事项

(1) 在SUPER Green Ⅰ点染法中,电泳时间不要超过2小时,否则SUPER Green Ⅰ会从DNA上分离出来,会产生弥散状条带。

(2) 用点染方法染色时,条带稍有滞后现象,如果需要确定片段精确分子量(和Marker对比),建议使用胶染法(方法1)。

(3) 在常规用酒精沉淀核酸的过程中,SUPER Green Ⅰ可以全部从双链核酸上去掉。

(4) 如果想对用 SUPER Green Ⅰ染过的胶进行 Southern blots,建议在预杂化和杂化溶液中加入 0.1%~0.3% 的SDS。

(5) 在紫外照射透视下,与双链 DNA 接合的 SUPER Green Ⅰ呈现绿色荧光。如果胶中含有单链 DNA 则颜色为橘黄而不是绿色。

(6) SUPER Green Ⅰ对玻璃和非聚丙烯材料具有一定亲合力。建议在稀释、贮存、染色等使用过程中用聚丙烯类容器。

                                   

 

EB和SUPER Green I胶染法对比图。每孔道分  

别上DNA marker 2000 10μL,5μL及2.5μL。                                       

 

           图1  胶染法               

 

 

 

 EB胶染和SUPER Green I胶染+点染对

比图。每孔道分别上DNA marker 2000 10μL,5μL及2.5μL。

      图2  胶染+点染法

  

 

EB和SUPER Green I点染法对比图。分别加1/10

体积上样的染料,室温静置5分钟,之后每孔道

分别上DNA marker 2000 5μL,2.5μL及1.25μL。

 

            图3   点染法

 

 

 

 

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