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腺病毒RNAi干扰

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1877

(1)原理
腺病毒(adenovirus,AV)是一种没有包膜的线状双链DNA,它能感染分裂细胞和非分裂细胞,在核内以神经元细胞的形式复制,存在多种AV血清型。到目前为止,构建的绝大多数载体都是基于血清型2和5,通过转基因的方法取代E1或E3基因,降低病毒的复制能力。这些重组病毒仅在表达高水平E1和E3基因的细胞中复制,因此适合应用于治疗的高效控制系统。腺病毒载体能够高效传递和表达基因的能力(尤其是在体外),由于具有宿主范围广,对人致病性低;在增殖和非增殖细胞中感染和表达基因;能有效进行增殖,滴度高;与人类基因同源;不整合到染色体中,无插入致突变性。对于难转染的细胞,如原代或非分裂细胞,采用病毒递送miRNA/shRNA的方式是非常有效的选择。
(2)服务流程
1)构建表达miRNA/shRNA的腺病毒载体,采用PacI消化纯化质粒使ITRs裸露出来。
2)将腺病毒表达克隆转染293A细胞。收获细胞以制备病毒粗提液。
3)将病毒粗提液感染293A细胞以扩增病毒。确定病毒滴度。
4)将病毒上清加入靶细胞中
5)分析miRNA/shRNA的表达和相应的Knockdonw结果
(3)您需要提供
1)表达miRNA/shRNA的质粒(提供测序图谱)或所要Knockdown的靶基因的名称、序列;
2)所需要的病毒滴度及总量,病毒是否需要纯化
3)若需要检测靶基因的表达变化,如需要请提供相应的抗体
(4)我们提供
1)提供重组后的腺病毒载体质粒,并附上PCR鉴定结果
2)提供已测定好滴度、可以直接进行后续分析的腺病毒储存液

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