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细胞爬片的方法与心得

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细胞爬片是细胞培养中比较经常会用到的,现将自己操作的一些方法与技巧拿与大家分享,如有不当的地方还望大家给与指正:
【爬片的准备】
1、爬片可用一般的盖玻片,也可用专用爬片;
2、应用盖玻片,可根据自己的需要剪裁成合适的大小,以备置于6孔板、12孔板或24孔板;
3、将剪裁好的爬片,置于浓硫酸中浸泡并过夜,第二天先用自来水冲洗20遍,再用三蒸水冲洗3遍(个人认为主要目的是冲洗干净就可以了),放在饭盒或者培养皿(一定是玻璃的哦,要不然就……)中烘干后进行高压消毒。
【培养板的准备】
1、 泡酸过夜
2、 冲洗,烘干(1、2步骤与前大致相同)
3、 放入超净工作台用紫外线照1~2小时就可以用了(在照之前可以将爬片一并放入,若细胞贴壁能力不强,可经多聚赖氨酸浸片后放入。贴壁能力强的话,就可以省略了,进行紫外线消毒)
注: 此步自己的经验是爬片可以先浸入消毒后的PBS内,紧接着放入培养板内。目的:浸过PBS的爬片依靠表面的液体,可以用培养板孔底贴和紧密,以利于细胞长到爬片上。(自己刚开始做的时候,经常就是细胞全都长在了爬片与培养板之间,爬片上细胞罕见。)
【细胞爬片】
1、 胰酶消化细胞后计数
2、 根据自己的需要选择合适的细胞密度种入培养板内即可
3、 第二天即可进行干预措施

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