UVB致皮肤角质形成细胞的损伤模型的制作方法

<font>材料和方法<br /> <br /> 1 试剂:胎牛血清(北京军医兽医防治中心) ,DMEM培养液(GIBCO ,美国) ,碘化丙啶PI(Sigma) ,Triton2X100 (BDH) ,Hoechst33342(Sigma) ,RNase (Sigma) 。<br /> <br /> 2 细胞及实验分组:人角质形成细胞株Colol6 (由北京师范大学生物系提供) 。分单纯对照、单纯照射、给药后照射、照射后给药4 组。给药后照射组为在照射前24 h 给药,照射后24 h 进行检测,照射后给药组为在照射后立即给药,照射后24 h 进行检测。<br /> <br /> 3 紫外光源及照射条件:光源为UVB 紫外灯管(上海金光灯具厂,6W) ,剂量率为6J・m- 2・min - 1 (由吉林大学环境卫生教研室进行测量) 。<br /> <br /> 4 药物种类:人参三醇组甙、Rg1、Rb1 由吉林大学有机化学教研室提供。<br /> <br /> 5 细胞周期:胰酶消化贴壁细胞,接种于24 孔平底培养皿中(5 ×105 细胞P孔) ,每孔先加300μl DMEM 培养液(含15 %胎牛血清) ,待紫外线照射后,加至1 ml ,置37 ℃、5 %CO2孵箱中。收集细胞, 0101 molPL PBS 洗2 次, 加RNase (011mgPml) 100μl ,100μl PI(含Triton2X100) 单染37 ℃、30 min 避光保存,用流式细胞仪FACScan (Becton Diskinson ,美国,氩离子激光激发,波长488 nm) 检测,每个样品收集1 ×104 个细胞,数据采集分析软件为ModFit LT。<br /> <br /> 6 细胞凋亡:加入100μl Hoechst33342 ,再加100μl PI(不含Triton2X100) ,0 ℃、阴暗处放置30 min ,用流式细胞仪收集1 ×104个细胞,Cellquest 软件分析结果。<br /> <br /> 见：<br /> 金光辉,人参组甙对紫外辐射致皮肤角质形成细胞损伤的保护作用<br /> 另请参见：<br /> 夏济平. 宋秀祖. 毕志刚. 茶多酚对紫外线辐射后的角质形成细胞和成纤维细胞增生影响的保护作用.临床皮肤科杂志 2003年05期<br /> </font>