糖的消化和转运

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糖的消化和转运

目的原理 采用小肠段翻转肠囊法观察小肠对多糖的消化和对葡萄糖的转运，了解小肠的膜消化和主动转运葡萄糖所需的条件。离体肠袢在充分给氧并满足营养、温度的条件下，在一定时间内仍可保留机能活动。制备翻转肠囊置于含糖溶液中，一段时间后称量盲囊重量、囊内液体量及肠囊内外糖浓度的变化，从而可计算出糖的转运速度等。

实验对象与用品 金仓鼠、豚鼠或家兔。恒温水浴锅、扭力天平、分光光度计 、95％氧气和5％二氧化碳混合气体、烧杯、试管、注射器、D-葡萄糖、可溶性淀粉、碱性铜试剂、磷钼酸试剂、Krebs氏液等。

方法步骤

(一)翻转肠囊的制备 金仓鼠断颈处理，死后迅即开腹，摘出全段小肠，由断口注入温热生理盐水，充分洗净肠腔后放置于平皿中，再以充有混合气体的Krebs氏液清洗1～2次。然后用玻棒将肠管粘膜面向外翻转。将肠管切成等长(<chmetcnv>4cm</chmetcnv> )的若干段。先结扎肠段一端，由另一端注入Krebs氏液1mL后也将其结扎，封闭成双侧都为盲端的肠囊待用。

(二)培养准备工作 与此同时，取A、B两个50mL容量的烧杯，各加入20mLKrebs氏液，置于<chmetcnv>37℃</chmetcnv> 水浴锅中，并通入混合气体，其流速约为<chmetcnv>1L</chmetcnv> /min，使气体在液体中呈连续小气泡不断地冒出。通气持续30min后杯口封盖。A杯加入1％淀粉溶液5mL，B杯加入0.05％葡萄糖溶液5mL。

(三)温育 取两只肠囊分别置于A和B杯中，在<chmetcnv>37℃</chmetcnv> 水浴锅中温育1h，其间每隔10min摇晃一次烧杯。温育完毕取出肠囊进行如下测定。

(四)测定

1.肠囊内液体量的测定：用滤滤纸擦净肠囊外表面的液体，用扭力天平分别称取其各自重量；然后剪破肠囊一端，收集囊内液体分别盛于两支小试管中。将肠囊纵行切开成片状，用滤纸彻底吸净囊腔内附着的液体，再分别称取两肠囊重量。可求出两个肠囊所盛的液体量(通常要大于注入量百分之几至十)。

2.测定糖含量，采用福林-吴比色法，操作程序如下：

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混合后立即用空白管液体调零点，用620nm波长比色。读取各管OD值，按标准管法计算糖浓度。

注意事项

1.加入磷钼酸后显色并不稳定，应迅速比色。

2.如果测定管OD值偏离标准管OD值太远，应改变葡萄糖标准溶液浓度(加大或减少)。

要求与思考题 根据实验结果讨论小肠对糖类的膜消化功能及对葡萄糖的吸收机理。

附注 本试验所用试剂配制方法如下：

1.碱性铜试剂：在400mL蒸馏水中加入无水碳酸钠<chmetcnv>40g</chmetcnv> ，在300mL蒸馏水中加入酒石酸<chmetcnv>7.5g</chmetcnv> ；在200mL蒸馏水中加入硫酸铜结晶<chmetcnv>4.5g</chmetcnv> 。上述三种溶液分别加热溶解，冷却后将酒石酸溶液倾入碳酸溶液中，混合后加入硫酸铜溶液。最后以蒸馏水定容为1000mL。

2.磷钼酸试剂：钼酸<chmetcnv>70g</chmetcnv> 、钨酸钠<chmetcnv>10g</chmetcnv> 、10％NaOH溶液400mL及蒸馏水400mL，混合、加温并维持沸腾30min，以除去钼酸中可能含有的氨。冷却后加浓磷酸(85％)250mL，最后用蒸馏水定容为1000mL。

3.Krebs氏液：NaCl<chmetcnv>6.9g</chmetcnv> ，KCl<chmetcnv>0.3g</chmetcnv> ，CaCl<chmetcnv>20.28g</chmetcnv> ，NaHCO<chmetcnv>32.1g</chmetcnv> ，MgSO<chmetcnv>40.14g</chmetcnv> ，KH2PO<chmetcnv>40.16g</chmetcnv> ，加蒸馏水定容至100mL，配制时为避免发生白色沉淀，先将CaCl2置于500mL烧杯内，加蒸馏水300mL，将其他成分置于<chmetcnv>1L</chmetcnv> 容量瓶内，加水500mL，再将经稀释溶解的CaCl2溶液边加边摇匀地加入容量瓶内，最后加水至1000mL刻度。