酵母质粒提取过程中关于玻璃珠的问题及解答

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问1:在提取酵母质粒 的时候,有一步用到玻璃珠,谁能告诉我玻璃珠的作用,而且在哪能买到玻璃珠,贵不贵?谢谢!

答1:在高盐浓度条件下,DNA吸附于玻璃珠上,吸附了DNA的玻璃珠经离心、洗涤去掉盐和杂物后,进行洗脱重悬于水或TE缓冲液中.DNA回收率高而无降解,操作简单、快速、方便.

答2:玻璃珠SIGMA有,可以问问代理.

也可以使用蜗牛酶裂解法破酵母细胞壁法.

问2:能给我具体说说蜗牛酶裂解法的步骤吗?谢谢.另外你知道玻璃珠的作用吗?它应该是吸附酵母染色体 DNA吧,而不是质粒DNA.你用过没有,它贵不贵,因为我们老板比较小气,所以在买药品方面比较慎重.在用玻璃珠的那种方法中,其它药品都齐了,就差玻璃珠了.谢谢!

答3:告诉你一种简便实用的提取酵母质粒的方法,其纯度完全可以用来测序 和做PCR.你可以尝试一下.

氯化苄提取真菌基因组的方法.在1.5ml eppendorf 管中加入0.1g菌体和500ul提取液,振荡使之充分混合,再加入10%SDS100ul,氯化苄300ul,剧烈振荡,使管内混合物成乳状.50度保温1h,每隔10min振荡混合一次,然后加入300ul 3mol/LNaCl(ph=5.2),混匀,冰水浴15min,6000rpm,15min,收集上清,加入等体积无水乙醇,室温沉淀20min,这时会有絮状沉淀出现.10000rpm,15min,沉淀用70%乙醇洗一次,室温尽量挥发残留的痕量乙醇,但不要让DNA完全干燥,加入 50ulTEbuffer溶解DNA.

提取液:0.1mol/LTris-HCL,PH=9.0+0.04mol/LEDTA ,PH=8.0

整个过程也就氯化苄可能需要购买,不过它的价格也非常便宜,500ml只需要32元.