单相琼脂扩散试验原理、方法与结果

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原理

一种定量试验，将一定量的抗体混合于琼脂内，倾注于玻片上，凝固后，在琼脂层上打孔，再将抗原 加入孔中，使其向四周扩散。抗原抗体复合物形成的沉淀环直径与抗原的浓度成正比。如事先用不同浓度的标准抗原制成标准曲线，则未知标本中的抗原含量即可从标准曲线中求出。本试验主要用于检查标本中各种免疫球蛋白和血清IgG含量。

材料

1.抗体：羊抗人IgG单价抗血清。

2.抗原 ：待检血清。

3.3%生理盐水琼脂 、生理盐水、载玻片、直径3mm打孔器、小三角烧瓶、毛细滴管、湿盒。

方法

1、制备含抗体的琼脂 板

取羊抗人IgG单价抗血清一瓶(效价1：80)，量取0.3ml于一小三角烧瓶中，加生理盐水11.7ml(40倍稀释混匀，置56℃水浴中恒温2~3分钟)。

取3%生理盐水琼脂 一管，隔水加热使溶，然后置56℃水浴中，待琼脂温度降至56℃时，立即加入等量1：40稀释抗血清，迅速轻轻混匀，勿使产生气泡，迅速倾入载玻片上，每片3.5ml，待凝固后打孔。如下图所示。

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2、稀释待检血清

将待检血清用生理盐水作40倍稀释，

3、打孔、加样

每份检样加两孔，加满(但不要溢出)，加样时毛细滴管尖端不要划破琼脂。

4、温育

将琼脂板置搪瓷盒，垫湿纱布或海绵以防干燥，37℃恒温箱24h。

结果观察与分析

测量并求出每份检样两孔的沉淀环平均直径，按照标准曲线求出IgG含量。

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