联会复合体的染色与观察

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Mose(1956) 最早在研究精喇姑精母细胞减数分裂前期的超微结构时发现联会复合体(synaptonemal complex, S.C)，1977年他又证明使用光学显微镜可以检查联会复合体。其后发展了许多适用于光学显微镜检查用的S.C染色法。依靠光学显微镜显示联会复合体的技术，不仅对于联会复合体的结构和功能的研究有用，而且在临床细胞遗传学中对染色体 异常、遗传性疾病的病因和病理研究，以及环境诱变剂的检测等均不失为一种新的有效研究手段。

实 验 目 的

1. 学习光学显微镜下显示联会复合体的实验技术

2. 观察光镜下联会复合体的形态结构

实 验 原 理

联会复合体是减数分裂前期同源染色体配对形成的非永久性核内特殊结构，典型的联会复合体由三股平行的线状结构组成，即两条平行侧线和一条纤细的中央轴组成。一般开始于偶线期，成熟于粗线期，消失于双线期。它与减数分裂三个重要环节同源染色体联会、交换以及分离有着密切关系。大量工作表明，联会复合体在真核生物的减数分裂过程中是普遍存在的。

实 验 用 品

一、材料 雄性小白鼠

二、器材

离心机 、显微镜、水浴、培养皿、镊子、剪刀、吸管、烧杯、量筒、离心管(10ml)、酒精灯。

三、试剂 (所用试剂均为AR级)

1、0.7%柠檬酸钠(柠檬酸三钠)溶液。

2、3%中性福尔马林(甲醛溶液):甲醛8.3ml，醋酸钠() 1.1g，加蒸馏水91.7ml。

3、50%硝酸银溶液

4、明胶显影液: 称取2g明胶(gelatin)粉末溶解于99ml蒸馏水中，加1ml甲酸。

5、甲醇-冰醋酸

实 验 方 法

脱颈处死动物取睾丸

↓

放2ml 0.7%柠檬酸钠培养皿中

↓

释放曲细精管内容物(剪开白膜，用解剖针和小弯镊挟出曲细精管并剪碎，用吸管轻轻吹打)

↓移至刻度离心管中

加8ml 0.7%柠檬酸钠溶液制成细胞悬液

↓

室温下低渗45~60min

↓

低渗终止前10min，加3%中性甲醛溶液0.3ml，至最终浓度为0.1%，混匀

↓

常规离心(1000r/min)

↓弃上清

甲醇和冰醋酸(3:1)混合液固定

↓

空气干燥法制片(关键是长时间的低渗液处理和添加福尔马林溶液)

↓

银染

[附] 银染方法

(1)在培养皿底部放一用少量蒸馏水润湿的滤纸，上放2根小玻棒(或竹杆)，置水浴内保温(80℃)。(2)玻片标本细胞面朝上平放其上，加4滴50%硝酸银溶液和2滴明胶显影液，复以盖玻片(或擦镜纸)，直到玻片标本呈金褐色为止，一般为3-4min。(3)移除盖片，并用蒸馏水快速漂洗，晾干。(4)观察或摄影，分析。

实 验 结 果

银染后的联会复合体呈金黄或黄褐色，两条同源染色体联会较紧，但端部仍可见联会复合体结构的双股性。可见Y染色体的大部分和X染色体的一部分局部配对，形成短而清晰的联会复合体。

作 业

1. 总结出利用银染法显示联会复合体的实验原理;

2. 绘制光学显微镜下联会复合体的形态模式图。