如何进行血细胞的分离实验

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血细胞由红细胞,白细胞,血小板等组成.实验中常用白细胞来做研究,如炎症渗出,细胞迁移,识别等都涉及到白细胞.白细胞又分为:粒细胞,淋巴细胞,单核细胞等.它们具有不同的功能.实验中常需要分离血细胞方能进行。

这里主要论述人外周白细胞的分离，主要是中性粒细胞(Neutrophil)，淋巴细胞(Lymphocyte)，单核细胞(Monocyte)的分离。其它骨髓，脾淋巴细胞等分离可参，不同种属间请注意分离液的选择。

细胞分离中需要注意的几个问题

1.如果您要做细胞培养 ，记住实验中所用的试剂(分离液，洗涤液等)、器械等都要是无菌消毒的，并注意实验中的无菌操作。

2. 离心转速单位及时间：目前国外的文献报道基本上用g为单位，注意g和转速(rpm)的换算。

3.离心温度：有的要求室温，有的要求4摄氏度。实验的操作要求尽可能熟练，连贯。

4.在用Ficoll分离单个核细胞(PBMC)时，通常含有少量的红细胞，对于一般的实验影响不大，如果实验要求较高，可采取裂解液(有的需要无菌)，并注意裂解时间控制，以免影响单个核细胞的活性。

5. 在用Percoll配不连续梯度时(一般用高渗NaCl)，注意各成份体积的准确性，否则密度与预期的不一样，影响分离效果。

6.用全血离心效果比全血稀释后再离心效果差，稀释一般等体积稀释一倍。

7.分离液与样本的体积比：一般应小于1：2(即一般为1体积分离液，2体积样本，不宜超过2体积，小于2体积均可)

8.洗涤液的成分：不同文献报道不一，有的使用PBS ，有的为Hank’s，KRP等，可自己选定。主要是离子浓度及成份的不同，有的含有Mg2+,Ca2+。

9. 细胞活性：0.2%台盼蓝染色3-5分钟，镜下观察计数死亡细胞(蓝染)。