用高温高压灭菌锅法快速制备细菌PCR模板DNA

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Autoclave method for rapid preparation of
bacterial PCR -template DNA
用高温高压灭菌锅法快速制备细菌PCR 模板DNA
Keith E. Simmon, Dewey D. Steadman, Sarah Durkin, Amy Baldwin, Wade H. Jeffrey, Peter Sheridan, Rene Horton, Malcolm S. Shields
指导老师︰
王玮龙　林宗岐　林忠毅　黄世杰　赖吉永老师 (按笔划)
报告者︰
91230012　林俊晔 91230015　郭孟儒 91230023　王浚楷
报告日期：2005 . 5 . 24
出处： Journal of Microbiological Methods
卷号：56 　　
页数：143－149　共 7 页
年代：2004　
Impact Factor：2.015
期刊分类：Microbiology
期刊排名：34/84

摘要
多数PCR 所需的template DNA的实验方法，皆需使用界面活性剂。但有些方法无法完全打破格兰氏阳性菌的细胞，因此无法完全放大基因片段。故本篇论文旨在找出适用于多数实验材料的PCR template DNA的实验方法，且能快速制备无污染、高产量。本篇论文使用的高温高压灭菌锅法( Autoclave method )能快速制备PCR-template DNA且不需用界面活性剂，并将高温高压灭菌锅法与其它六种实验方法做比较，包括Boiling Triton X-100、CTAB、Boiling SDS、modified CTAB、lysozyme / proteinase K 、Bead beating。研究中所使用的4种实验材料来源分别为：Enterococcus ( 肠球菌 )、Escherichia coli ( 大肠杆菌 ) 、natural marine bacterial community ( 海水中的细菌群落 )、 Antarctic cyanobacterial-mat ( 南极蓝绿菌丛 )。实验发现，高温高压灭菌法与其它制备PCR-template DNA的方法相较之下，PCR amplifiable template DNA的质量有三点优于其它方法：1. 高产量　2. 短处理时间　3. 低实验成本。故将高温高压灭菌锅法应用在萃取PCR-template DNA方面，效果确实优于其它萃取方法。


名词解释

SDS ( sodium dodecyl sulfate )
具一个极性头部，与一条非极性尾巴，是一种界面活性剂，就是俗称的清洁剂。SDS 可以把非极性尾巴镶入蛋白质三级构造的内部，而以其极性头部与外界的水分子 结合，因而使得蛋白质变性。

Lysozyme
可水解细菌 细胞壁中 肽聚醣 的糖键，使得菌体无法承受渗透压逆境而破裂的一种酶。

Bead beating
利用微小的玻璃珠，经由震荡打破细胞的技术。

CTAB ( cetyltrimethyl-ammonium bromide )
　 十六烷基三乙基溴化铵，为萃取DNA时所用的离子清洁剂，可以溶解细胞膜。

Triton X-100
　 非离子性清洁剂，和CTAB有同样的功能可以溶解细胞膜，但效果较差，且必须在高温下才有较好的效果。