已知基因序列的获取策略——兼谈引物设计与序列分析
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引物设计 专栏:
http://ask.bbioo.com/special/experiment/PrimerDesign.htm
一、如何获取已知目的基因的序列信息
先查找其蛋白相关信息,了解该基因编码产物的基本情况与功能(www.expasy.org)
进一步查找其核酸相关序列信息,常用数据库:Genebank、EBI、DDBJ
二、目的基因cDNA序列的获取方法
cDNA文库 扫描
RT-PCR
人工合成
组织RNA的提取
-在匀浆器中加工冷冻的组织
-通过注射器加工冷冻的组织
-在液氮中将组织研磨成粉末
-在液氮中研磨组织至粉末状,细胞裂解更完全,产量比前二者多一倍。
-合适的RNA提取 方法加上合适的组织处理方法,才能够获得最佳的提取效果
RNA提取 两要素
忌讳贪多 :不能指望1ml Trizol 提取100mg以上组织,一般50mg用1mlTrizol较合适
速战速决 :尽量缩短提取时间,不要完全照搬Protocol,比如匀浆后如果没有很多组织碎片的话,可以立即加入氯仿,立即离心,14000rpm离心10min,取完上清加入0.6~1体积的异丙醇,立即高速离心(14,000rpm,5min),..... 总之尽量快速!