如何从自己筛到的菌中获取一种酶的基因序列？

先把菌裂解，获取基因序列，然后用已知引物进行配对

有直接提取和人工合成法，后者又包括利用逆转录法和化学合成法2种．将目的基因与运载体结合时，必须使用相同的限制性内切酶 处理目的基因和运载体，然后DNA连接酶进行重组．基因工程中常用的运载体有质粒、动植物病毒、噬菌体

等，其中质粒是最常用运载体．作为运载体通常要有标记基因，便于对目的基因是否导入进行筛选。

获取目的基因序列的方法有很多种，以下是一些常用的方法：

PCR扩增：根据该酶的保守区域设计特异性引物进行PCR扩增。如果目的基因序列中含有较多的变异，可以考虑设计简并引物，但是需要根据该酶的序列进行合理设计，尽可能避免引物间的交叉杂交。在PCR扩增过程中，需要根据反应体系的优化来调节扩增条件，如引物浓度、模板DNA浓度、反应缓冲液体系、退火温度和时间等。扩增出的产物可以通过PCR产物克隆测序来验证其准确性。

基于同源克隆：在已知酶的同源物种中，通过PCR扩增同源基因并进行序列比对，找到保守区域，再设计特异性引物进行PCR扩增。

基于转录组或基因组数据：如果该菌的转录组或基因组已经被测序，可以在数据库中搜索相关信息，找到目的基因序列并设计特异性引物进行PCR扩增。

对于设计简并引物而言，需要考虑以下几点：

碱基组合：简并引物的碱基组合需要根据该酶的序列特点进行设计。可以根据AT、GC含量进行合理的组合。比如，可以在引物中加入“N”表示任意一种碱基，以增加引物与模板的匹配度。

引物长度：简并引物的长度需要合理设计，太短则可能存在非特异性扩增的可能，太长则可能存在引物间的二次结构或杂交，影响PCR反应。

引物位置：简并引物的位置需要在保守区域内进行设计，以保证特异性。需要考虑引物间的距离和碱基组合的优化，以提高引物特异性和PCR反应效率。

引物浓度：简并引物的浓度需要优化，以保证扩增效率和特异性。