香菇菌种生产的方法与步骤

(一)母种生产培养基的配方选择

一是马铃薯、葡萄糖、琼脂培养基(PDA)：去皮马铃薯200克，葡萄糖20克，琼脂16~23克，水1 000毫升。氢离子浓度1 000~10000纳摩／升(pH5~6)，用于分离、培养菌种。

二是PDA改良培养基(甲)：马铃薯(去皮)200克，葡萄糖20克，磷酸二氢钾(KH2PO4)2克，硫酸镁(MgSO4)0．5克，维生素B110毫克，琼脂20克，水1000毫升，灭菌后氢离子浓度3163～10000纳摩／升(pH5．0～5．5)，用于培养、分离菌种。

三是PDA改良培养基(乙)：马铃薯(去皮)200克，麸皮或米糠50克，硫酸镁0.5克，维生素B110毫克，琼脂20克，灭菌后氢离子浓度3163～3981纳摩／升(pH5．4～5．5)。

四是PDA改良培养基(丙)：心材木200克，细米糠(或麸皮)100克，硫酸铵1克，麦芽糖(或葡萄糖)20克，琼脂20克，水1 000毫升，灭菌后氢离子浓度3163～10000纳摩／升

(pH5.0～5.5)，用于分离菌种。

五是麦芽浸膏、酵母浸膏、琼脂培养基(MYD)：麦芽浸膏3克，葡萄糖10克，酵母浸膏3克，琼脂20克，蛋白胨5克，水1 000毫升(用于菌种培养)。

六是麦芽浸膏、蛋白胨培养基(MPA)：麦芽浸膏20～25克，蛋白胨10克，琼脂20克，水1 000毫升(用于分离、培养、保存菌种)。

上述6个培养基配方中，马铃薯、葡萄糖、琼脂(PDA)配方应用最普遍。在此着重介绍PDA培养基的配制方法与步骤：

1．制备培养基的操作程序

选择优质马铃薯，去皮或挖去发芽眼，削去发青皮，切成薄片，称取200克，置于钢精锅，加水1 000毫升，煮沸后小火保持30分钟，趁热用8层纱布过滤后放人有1 000毫升刻度的量杯(或量筒)中，补充水到1 000毫升，倒回钢精锅，加琼脂继续加热，待琼脂溶化后，再加葡萄糖，再补水至1000毫升，用玻璃棒搅均匀，趁热分装试管，或装入三角瓶备用。

2．分装试管

将配制好的PDA培养基，趁热(60℃)倒人事先准备好的量杯或玻璃漏斗，分装试管。每支试管装培养基为管长的1／4，培养液不可贴附管口内壁，如有沾附物必须揩拭干净。

3．做棉塞

取适量棉花做成较紧实的棉塞，塞入试管约2厘米左右，外留1厘米，紧贴试管内壁，松紧度以用手指提起棉塞而不脱掉为宜，光圆不起皱(如图3—1)，尔后将试管放入铁丝筐内。

4．灭 菌

将装有培养基的试管放人灭菌锅的铁丝筐内，上面盖上牛皮纸或聚丙烯塑料薄膜，包扎好，以防棉塞受潮。加热灭菌时，排尽锅内的冷气，当温度升到121℃时，维持30分钟后停止加热。待指针回到零点，先打开锅盖的1／10开度，等到无直冲蒸气时，再打开全部锅盖，取出试管。

5．在斜面上摆放试管

将取出的试管冷却到50～60℃后，放到用木架或木条摆成一定角度的斜面上，小试管斜面长2厘米，大试管(18×200)斜面长6厘米左右。待完全凝固后，收取备用。

6．灭菌效果检查

随机取3管斜面，放在28℃下进行空白培养5～7天后，检查斜面上有无细菌和霉菌菌落。如果发现有杂菌，说明灭菌不彻底，要重新灭菌。

(二)接种与培养

1．接 种

在无菌室(接种室)或接种箱内，酒精灯火焰旁进行无菌操作。具体程序如下：左手拿菌种管和待接种的斜面试管，右手拿接种耙，在火焰上来回烧红，拔去菌种管的棉塞，将管口在火焰上烧一下，再把接种耙烧一下，迅速插入种管，稍加冷却，切取米粒大小菌丝块(一定要带培养基)，迅速放入待接种管斜面中心位置(为争取时间，在斜面接两点以上为宜)，拿出接种耙后，再把管口烘烤一下，烧一下棉塞，迅速塞好棉塞，灼烧一下接种耙。到此即完成了一个接种程序，以下依此类推。

2．培 养

将接种后的试管，放入培养箱或培养室进行恒温培养(25℃±1℃)，或利用适宜的自然气温培养。要保证培养室空气新鲜，环境干净，无光或弱光。为此，必须保持空气相对湿度

70％左右，在试管上盖上纱布，或盖上薄棉毯，拉上窗帘，形成无光培养。因试管斜面长短不同，一般需经8～14天培养，才能长满试管斜面。

(三)母种质量检查及提高纯度对策

1．斜面优质菌丝形态

在马铃薯、葡萄糖、琼脂(PDA)培养基斜面上，菌丝生长洁白，呈棉绒状，密度一致，前沿菌丝(先端)整齐，粗壮。有的棉绒状菌丝发达，如苏香1号，Cr-02；有的棉绒状菌丝不发达，如271A，271B，早生一号。后者比前者菌丝生长快，但菌龄较长。

2．斜面菌丝不纯现象

在斜面上菌丝灰白，棉毛菌丝不平坦不整齐，前沿菌丝不齐、有缺口，这说明有杂菌污染。如斜面上有异色，可能是镰刀菌污染。如斜面上特别是菌丝边缘出现粘稠状物即蜡状、油状，可能是细菌污染。如斜面上呈黄、绿、黑等颜色，则可肯定是霉菌污染。若斜面产生色素，也表明有杂菌污染。将斜面对着光看背面，如有小黑点遮光，说明杂菌菌落被香菇菌丝覆盖了。 (责任编辑：大汉昆仑王)