Blot印迹膜的选择很重要

 除了个别在PAGE胶上利用荧光或者酶活性直接做类似Western反应的“前卫”方法，印迹法的常规主流，无论是Southern、Northern还是Western Blot，都需要将电泳结果转印到膜上固定，再进行显色显影反应。对于各种Blot来说，作为承载实验结果的载体，包括各类斑点杂交或者克隆转印，膜的选择就显得很重要。

    德国老牌的厂家Schleicher & Schuell是世界第一个生产硝酸纤维素膜的厂家，其产品标准即为同类产品的行业标准，产品质量毋庸置疑，去年被对手之一的Whatman收购而成为Whatman旗下产品。不过由于这个牌子的产品品种颇多，初次选择时不免让人眼花缭乱，小编在这里特别介绍一下，便于大家选择。

硝酸纤维素膜：
    Protran：纯的硝酸纤维素膜。在所有膜中，Protran膜的封闭最简单容易，从而可有效阻断非特异结合，降低背景，无需严谨清洗即可得到良好的信噪比；广泛适用于同位素、化学发光法、显色法和荧光法等不同的标记显色方法，适用于包括Southern，Northern，Western Blot在内的多种实验。对于基于HRP的化学发光法印迹反应，效果尤佳。不过，由于是纯硝酸纤维素膜，比较脆，操作上要特别注意。Protran孔径分为0.45μm；0.2μm；0.1μm这3种。0.45μm膜通常适用于分子量大于20KD的蛋白分子和300bp以上大小的核酸；而0.2μm膜则由于密度大孔径小能有效减少“渗漏”，更适用于分子量小于20KD的蛋白质分子，包括300bp以下的短链DNA或者寡核苷酸。而0.1μm膜则是用来对付7KD以下的蛋白质小家伙们的。如果你的实验中的小分子蛋白质Western Blot老做不好（比如EGF），大概有可能就是膜的孔径不够小，漏掉拉（当然电泳Buffer不用甘氨酸也是窍门之一）。硝酸纤维素膜不需要甲醇预先浸润，用前直接铺在在水面渗透润湿后就可以使用。Protran的另外一个小小优点是非常稳定，5年前保存Western Blot的实验结果在历时5年后再次做显色反应，依然能正确显色。虽说需要重复用到5年前结果的，好像很少见，但能说明其性质稳定，可保存蛋白质。

    在操作上，除了小心之外，Protran硝酸纤维素膜适用于常规电转、半干转、真空转、毛细转移，但不适合用碱法。固定方法，如果样本是核酸，可以用紫外交联或者80度烘干固定，蛋白质则只需要干燥固定即可。Protran适用于各种通用的显色方法如化学显色，化学发光，同位素和荧光法。

    Optitran：夹心的硝酸纤维素膜，中间的聚酯基质两面均匀覆盖硝酸纤维素，使得该种膜具有硝酸纤维素膜的所有优点同时兼具强韧性，特别适合需要反复操作的实验，比如需要多次重复标记杂交和重复洗脱的实验----有时候对同一个电泳结果需要Western检测多个目标蛋白，在检测第一个目标蛋白后，可用酸洗（如0.2MGlycine/0.5MNaCl,pH2.8）2-5min，Tris中和，从而洗脱第一个目标蛋白抗体，再进行第二个目标抗体的检测，Optitran的强韧的高耐受性正好适合这类重复操作的要求。Optitran膜0.45μm和0.2μm两种孔径规格提供，除了单位面积最大载量相对Protran会小一些，其他选择和使用和Protran都是一样的。Optitran由于带有聚酯，通常不推荐用荧光检测。

PVDF膜

    Westran S：很高的蛋白质结合效率和载量，即使很剧烈的反复洗涤条件也不影响目标蛋白结合。0.2μm小孔径，防蛋白质渗漏。最重要的是，PVDF膜化学性质稳定，可以兼容测序----将蛋白条带剪下可以直接去N端测序。如果需要做蛋白质测序，PVDF是最佳选择。

    Westran Clear Signal：和小S的区别是孔径，这个是0.45μm，其他特性一样，专为蛋白质Western用的。由于孔径大，转移速度也比较快，截留的背景更少，信号就更清晰。CS可以兼容常规的蛋白燃料，比如丽春红，氨基黑，靠马斯亮蓝染色。

    PVDF膜用前需要“飘在”甲醇液面浸润（通风橱操作），然后才能进行下一步。转移方法适用于半干转或者电转，其他不适合。而固定的方法主要采用干燥固定。显色，包括化学发光法和同位素，化学显色法，都适合PVDF膜。

尼龙膜
  Nytran SuPerCharge：带高正电荷的尼龙膜。尼龙膜柔软，强韧，耐折叠，可耐受强度较高的机械操作，这一点上远胜于硝酸纤维素膜，并因而广泛用于膜芯片，Macroarray，或者预制核酸杂交膜上。通常核酸分子在电泳条件下是带负电，尼龙膜上电荷越高，吸附带负电的核酸分子的能力越强，不过蛋白质荷电特性与核酸不同，尼龙膜更常见用于Southern或者Northern。Nytran SuPerCharge经过特殊处理，均匀附着在中间介质两面，表面孔径均一，电荷量是常规带正电核酸膜的3倍，对核酸的吸附更强，更重要的是经过特殊处理，克服以往带电尼龙膜背景高的弱点，能得到良好的信噪比。

    尼龙膜适用于各种转移方法，如电转，半干转，毛细管，碱法等，固定方法是紫外交联。不过就不太适合化学显色和荧光检测。因为尼龙本身有荧光，会干扰结果；而化学显色剂的微小颗粒容易附着而产生斑点背景。

    Nytran同样分0.45μm和0.2μm孔径，分别适合300bp以上或者以下的核酸片段。选择的标准是看你的核酸大小。

    Nytran N是常规带正等电荷的尼龙膜。除了荷电小其他特性和差不多，如果你不详要高电荷，这个就是一选择。 (责任编辑：大汉昆仑王)