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地高辛(DIG)产品选择指南——选择检测方法

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检测方法
对于探针和靶序列杂交之后的检测,我们通常使用碱性磷酸酶(AP)耦联的抗体,采用显色法或化学发光法检测。在碱性磷酸酶的底物中,我们使用CDP-Star或CSPD用于化学发光法检测,NBT/BCIP用于显色法检测。同时,对于膜杂交中的化学发光信号的检测,建议使用Lumi-Film以获得最理想的信号。

检测底物

即用型CDP-Star
碱性磷酸酶作用于CDP-Star底物,产生的光信号被X胶片(例如:Lumi-Film)曝光或是图像设备采集。与CSPD相比较,CDP-Star的主要特点在于光信号产生的速度更快(10倍于CSPD)同时强度更强,可大量缩短曝光时间。其信号的释放可以持续大概两天的时间,因此可以进行多次曝光。化学发光的底物仅仅适用于尼龙膜。

即用型CSPD

碱性磷酸酶作用于CSPD底物,产生的光信号可被X胶片(例如:Lumi-Film)
曝光或是图像设备采集。由于其同样具有持续的发光过程,因此也可以进行多次曝光。在尼龙膜上使用CSPD或CDP-Star底物的杂交,还可进行探针的拨离和重探。


NBT/BCIP
使用类似NBT/BCIP显色底物的好处就在于,检测的过程中不需要X胶片,既可以使用尼龙膜也可以是使用硝化纤维素膜。然而,如果想要获得高灵敏度的检测结果,可能就需要较长的时间了(几个小时)。这种方法也有其不足之处:首先这种方法只能一次性获得信号,不能多次检测;在探针拨离前,需要使用二甲基甲酰胺先将膜上沉淀的颜色去除。

其他的底物和抗体

在整个DIG系统中,还有其他的一些底物和多种荧光抗体,例如Fast Red Tablets, BM Purple, HNPP Fluorescent Detection Set 和DAB POD Substrate ;供不同研究的需要。


(责任编辑:大汉昆仑王)
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